[发明专利]一种食甲酸和CO2

权利要求书

1.一种具有食甲酸和CO₂自养能力的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌导入了外源的甲酸同化酶基因簇fhs-fchA-folD和甲酸脱氢酶基因CbFDH1，并过表达了内源的甘氨酸裂解酶复合体EcgcvTHP。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，

所述的甲酸同化酶基因簇fhs-fchA-folD序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的甲酸脱氢酶基因CbFDH1序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的甘氨酸裂解酶复合体基因EcgcvTHP序列如SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求1或2任一项所述重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建具有甲酸同化功能的模块化质粒pM6tac-fhs-fchA-folD；

构建具有CO₂同化功能的模块化质粒pACYC-EcgcvTHP-CbFDH1；

构建具有食甲酸和CO₂自养能力的重组大肠杆菌：

将构建的具有甲酸同化功能的模块化质粒和具有CO₂同化功能的模块化质粒，电击转化导入大肠杆菌，氨苄霉素和氯霉素双抗性平板培养获得重组大肠杆菌。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述构建具有甲酸同化功能的模块化质粒pM6tac-fhs-fchA-folD的方法如下：

(1)以质粒pETDuet-1为基本骨架，替换T7启动子为tac启动子，并在所述tac启动子前面引入酶切位点AvrII，在T7终止子前后分别引入酶切位点SpeI和NheI，得到模块化质粒的底盘pM6tac；

(2)分别克隆甲酸同化酶基因簇的基因组序列中的fhs、fchA、folD基因片段，酶切后分别连接至pM6tac质粒，得到3个重组质粒；

(3)通过不同酶切位点的互补与消除，通过对所述得到的3个重组质粒酶切、连接，将三个携带tac启动子的甲酸同化酶基因fhs、fchA、folD连续堆砌在底盘质粒pM6tac上，从而获得具有甲酸同化功能的模块化质粒pM6tac-fhs-fchA-folD。

5. 根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述底盘质粒pM6tac基因序列如SEQID NO.4所示。

6. 权利要求4所述方法得到的具有甲酸同化功能的模块化质粒pM6tac-fhs-fchA-folD，所述模块化质粒的序列如SEQ ID NO.5所示。

7.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述构建具有CO₂同化功能的模块化质粒pACYC-EcgcvTHP-CbFDH1的方法如下：

以质粒pACYCDuet-1为底盘质粒，在所述质粒其中一个多克隆位点插入EcgcvTHP基因序列，得到质粒pACYC-EcgcvTHP；在所述质粒另一个多克隆位点插入CbFDH1基因序列，得到质粒pACYC-CbFHD1；分别对质粒pACYC-EcgcvTHP和质粒pACYC-CbFHD1进行双酶切，回收线性质粒片段pACYC-CbFHD1和基因片段EcgcvTHP，连接、转化、抗性平板筛选得到含有CO₂同化功能的模块化质粒pACYC-EcgcvTHP-CbFDH1。

8. 权利要求7所述方法得到的具有CO₂同化功能的模块化质粒pACYC-EcgcvTHP-CbFDH1，所述模块化质粒的序列如SEQ ID NO.6所示。