[发明专利]一种施氏鲟精子冷冻保存液及保存方法

说明书

本发明提供了一种施氏鲟精子冷冻保存液及保存方法，该冷冻保存液由包括如下重量份的组分制得：氯化钠1‑5份，氯化钾1‑5份，乙二醇5‑10份，磷酸二氢钠3‑10份，吡哆醇0.5‑2份，GSH 0.1‑1份，HA 0.01‑1份，SDS 0.1‑1份，Vc 0.5‑2份。本发明所述的施氏鲟精子冷冻保存液降低了冷冻对精子细胞结构和遗传物质的损伤，提高了冷冻精子的成活率和受精率。

技术领域

本发明属于施氏鲟繁育领域，尤其是涉及一种施氏鲟精子冷冻保存液及保存方法。

背景技术

施氏鲟属硬骨鱼纲、幅鳍亚纲、硬鳞总目、鲟形目，主要分布于阿穆尔河(中国黑龙江)流域，因具有生长速度快、抗病力强、经济价值高等优点，已成为中国备受欢迎的养殖品种，占中国鲟鱼总产量的50％，而且仍有增加的趋势。但由于养殖技术粗放、养殖密度过高，导致疾病暴发频率升高，给鲟养殖业的健康可持续性发展造成了极大阻碍。近年来，科研工作者在施氏鲟资源保护、人工蓄养、人工繁殖、胚胎发育、性腺发育等方面做了大量工作,为保护施氏鲟种质资源提供了理论依据。但对于施氏鲟的精子保存以及精子质量还有待进行深入研究。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种施氏鲟精子冷冻保存液及保存方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种施氏鲟精子冷冻保存液，该冷冻保存液由包括如下重量份的组分制得：

氯化钠1-5份，氯化钾1-5份，乙二醇5-10份，磷酸二氢钠3-10份，吡哆醇0.5-2份，GSH(谷胱甘肽)0.1-1份，HA(透明质酸)0.01-1份，SDS(十二烷基硫酸钠)0.1-1份，Vc 0.5-2份。

优选的，所述的冷冻保存液由包括如下重量份的组分制得：

氯化钠1.8份，氯化钾2.6份，乙二醇8.2份，磷酸二氢钠3.5份，吡哆醇0.54份，GSH0.26份，HA 0.05份，SDS0.13份，Vc 0.74份。

所述的施氏鲟精子冷冻保存液的制备方法，包括如下步骤：将各组分溶于蒸馏水中，混合均匀后即成。

进一步，所述的各组分的质量之和与所述的蒸馏水的质量之比为10-20:100。

一种施氏鲟精子的保存方法，包括如下步骤：将所述的冷冻保存液的温度降至5-10℃，然后将施氏鲟的精液与所述的冷冻保存液混合、摇匀，然后将混合液进行分装，将小包装混合液在1-3℃环境下预冷，然后将预冷后的小包装混合液置于液氮面2-5cm处进行速冻，速冻完成后放入液氮中保存即成。

进一步，所述的预冷步骤的时间为20-60min。

进一步，所述的速冻步骤的时间为30-120min。

进一步，所述的施氏鲟的精液与所述的冷冻保存液的体积比为1:5-10。

施氏鲟的鲜精乳白略带黄色，呈牛奶状；精浆与精液体积比为60-87：100。施氏鲟精子呈短棒状，分为头部、中段和尾部；头部前端窄、后端宽，且具有伞状顶体，中段呈漏斗状，尾部扁平细长，侧鳍。施氏鲟的精液相对较稀，浓度为13-40％，精子密度在不同个体之间差异很大，从每毫升10亿个到50亿个不等。

大多数硬骨鱼类精浆渗透压为250-300mOsmol/kg，鳃类的偏低，一般不超过100mOsmol/kg。而且施氏鲟的精浆组成的和浓度也比其它硬骨鱼低的多，因此，施氏鲟精子对外源的Na+和K+很敏感，浓度稍高就会抑制其活力。

乙二醇的毒性低且渗透性好，对精子的冷冻保护作用好。可以使解冻后的精子具有良好的品质。