[发明专利]一种犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用，包括包被有抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体。本发明还公开犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒的制备方法和应用。本发明具有操作简便、安全、快速、设备简单、主观因素误差小和人员技术水平要求低等优点，可以实现大批量样品的快速检测分析。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

包虫病(棘球蚴病)(Hydatid Disease，HD)主要由细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus,E.granulosus，Eg)的中绦期幼虫寄生在哺乳动物脏器内引起的疾病，是一种严重的人畜共患寄生虫病。包虫病呈世界性分布，遍及五大洲，在中东、南欧、拉丁美洲、中亚、澳大利亚和非洲部分国家流行，导致全球的公共卫生和经济问题，严重危害人民身体健康和生命安全、畜牧业的健康养殖、阻碍社会经济发展。在我国，包虫病流行区主要分布在内蒙古、宁夏、甘肃、四川、青海、新疆、西藏等省、自治区的牧区和半农半牧区，覆盖国土面积44％，受威胁人口约6600万，细粒棘球绦虫引起囊型包虫病，在人群中的发病率较高，占包虫病的95％，包虫病给当地患者及其家庭带来极大的痛苦和沉重的经济负担，是西部农牧区群众因病致贫、因病返贫的主要原因之一。

细粒棘球绦虫是一种两宿主寄生虫，其中间宿主种类较多，但绵羊是最主要的中间宿主，人也属于中间宿主，但不参与循环，是受害者，而终末宿主主要是犬、狐狸等犬科动物，成虫在终末宿主犬、狼、狐狸等食肉动物体内发育成熟后，其含卵的孕卵节片随粪便排出，随后每7～14d虫卵成熟、孕节脱落一次，成虫在犬体内生长约6个月，在此期间，不断有虫卵排出；中间宿主因摄入虫卵受到感染而发病。因此，包虫病发生的根源是犬体内的棘球绦虫释放的虫卵，终末宿主(犬科动物)是包虫病传播过程中最重要的传染源，了解和掌握家/牧犬感染Eg状况是包虫病流行病学调查中一项重要的指标，也是包虫病防控措施实施后判定干预效果考核的必要指标之一。

现阶段，市场上尚无有效的商品化预防犬感染细粒棘球绦虫的疫苗，准确且快速的诊断是高效防控包虫病的基础。国际公认的犬科动物包虫病诊断的金标准方法是氢溴酸槟榔碱下泻法，但是该方法存在弊端：(1)对操作人员感染风险大；(2)对环境造成污染；(3)少量犬不下泻，无法达到检测目的；(4)操作复杂，耗时较长；(5)不易进行大量检测等。

目前，获得新兽药证书的商品化的犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒尚未出现在市场上。因此，开发一种快速、安全、简便、特异性强且敏感度高的检测方法将为犬科动物包虫病的诊断及控制提供有效的保障。

发明内容

本发明的目的在于提供一种犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明所提供的试剂盒和检测方法对犬细粒棘球绦虫抗原的检测具有特异性强、敏感性高以及操作简便等优点，能够实现大批量样品的快速检测。

其具体技术方案为：一种犬细粒棘球绦虫抗原双抗夹心ELISA检测试剂盒，包括包被有抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体。

优选地，所述包被抗体为抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体是由杂交瘤细胞Anti-XJEgSfAg-1F3分泌的，所述杂交瘤细胞株Anti-XJEgSfAg-1F3保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2020196；辣根过氧化物酶标记的抗细粒棘球绦虫成虫表膜抗原的单克隆抗体是由杂交瘤细胞Anti-XJEgSfAg-4E8分泌的，所述杂交瘤细胞株Anti-XJEgSfAg-4E8保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2020183。

优选地，该试剂盒还包括：封闭液、稀释液、洗涤液、显色液和终止液。