[发明专利]胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒和方法及剑麻皂素的应用

说明书

本发明公开了一种胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒、胶乳增强竞争免疫比浊检测方法及剑麻皂素的应用。所述胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒包括试剂R1与试剂R2，所述试剂R1包含目标检测物‑载体复合物和剑麻皂素，所述试剂R2包含抗目标检测物抗体偶联的乳胶微球。本发明的胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒具有优异的准确度和稳定性，可与金标准HPLC检测值高度一致。

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体涉及一种胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒、胶乳增强竞争免疫比浊检测方法及剑麻皂素的应用。

背景技术

免疫比浊法(Turbidimetric inhibition immuno assay)是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

与普通免疫比浊法不同，胶乳增强竞争免疫比浊检测法主要应用于检测小分子药物，其包括两种模式：目标检测物偶联微球和抗体偶联微球。其中，抗体偶联微球的基本原理是：抗目标检测物抗体偶联于乳胶微球表面形成抗体偶联的乳胶微球，样本中的目标检测物与试剂盒中目标检测物-载体复合物竞争结合偶联于乳胶微球表面的抗体，样本中的目标检测物浓度越高，乳胶微球表面抗体被其结合的程度越大，目标检测物-载体复合物可引发的胶乳聚集程度(浊度)越小，反应体系的浊度大小与样本中的目标检测物浓度呈负相关，通过测定不同浊度反应体系的吸光度，建立校准曲线，计算样本中目标检测物的浓度。

但是，待测样品中的小分子目标检测物常常与蛋白有较高的结合率。例如，泊沙康唑小分子药物与蛋白结合率98％。并且，样本中还存在脂质等杂质。这些都对胶乳增强竞争免疫比浊检测存在干扰，影响了检测结果的准确度及稳定性。

为了解决此问题，现有报道尝试在检测试剂中加入曲拉通或吐温-20，但实际效果并不理想，准确度和稳定性仍然不佳，未能完全解决上述问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的胶乳增强竞争免疫比浊检测法准确度和稳定性不高的缺陷，而提供一种胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒、胶乳增强竞争免疫比浊检测方法及剑麻皂素的应用。本发明的胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒具有优异的准确度和稳定性，可与金标准HPLC检测值高度一致。

本发明提供的技术方案之一为：一种胶乳增强竞争免疫比浊检测试剂盒，其包括试剂R1与试剂R2，所述试剂R1包含目标检测物-载体复合物和剑麻皂素，所述试剂R2包含抗目标检测物抗体偶联的乳胶微球。

本发明中，所述剑麻皂素在试剂R1中的浓度为表面活性剂的常规浓度，优选为0.1-1.0wt％，更优选为0.4-0.8wt％，进一步优选为0.6wt％。

本发明中，所述目标检测物指胶乳增强竞争免疫比浊检测可检测的生物体或非生物体样本中的各种小分子化合物，如氯氮平、奥氮平、泊沙康唑(posaconazole)、万古霉素、三聚氰胺和伏克伦特罗等，优选为泊沙康唑。

本发明中，所述目标检测物-载体复合物中所用载体为本领域常规的小分子半抗原载体，如蛋白质或多糖，具体如牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)或钥孔血蓝蛋白(KLH)等。所述的目标检测物-载体复合物优选为泊沙康唑-牛血清蛋白。

本发明中，所述目标检测物-载体复合物在试剂R1中的浓度按本领域常规，一般为200-600ng/ml，优选为300-500ng/ml，例如400ng/ml。

本发明中，所述抗目标检测物抗体偶联的乳胶微球中所用抗目标检测物抗体为能与所述目标检测物发生特异性免疫结合反应、具有抗体特有结构特征的蛋白。