[发明专利]一种亚硝酸盐的检测方法

说明书

本发明公开了一种亚硝酸盐的检测方法，该检测方法包含以下步骤：（1）配制对照品和供试品溶液；（2）检测：所述检测方法具体如下：色谱柱：Thermo Acclaim Trinity P1；流动相：磷酸二氢钾缓冲液‑乙腈，体积比：50~65∶35~50；流速：0.4~0.5mL/min；柱温：25℃~35℃；检测波长：205~215nm；（3）计算亚硝酸盐的含量。该检测方法可以快速、准确检测供试品中亚硝酸盐的含量，准确度、精密度、重现性及稳定性均良好。

技术领域

本发明涉及一种亚硝酸盐的检测方法，尤其涉及一种可以快速、准确检测亚硝酸盐含量的检测方法。

背景技术

亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，广泛存在于人类环境中，是一种常见的含氮化合物，在酸性环境中易和酰胺等反应生成强致癌物质-亚硝胺类物质。2018年7月，EMA公告称在缬沙坦未知杂质中，发现极微量的基因毒杂质亚硝基二甲胺（NDMA），随后FDA公布了一系列基因毒性杂质，均为亚硝胺类杂质。而亚硝酸盐作为亚硝胺类的前体化合物，因此，需要对其进行源头控制。

目前，亚硝酸盐的常用检测方法为重氮偶合分光光度法，本法原理为在pH1.7以下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺重氮化后再与盐酸N-(2-萘)-乙二胺产生耦合反应，生产紫红色的偶氮染料，比色定量，该方法样品制备复杂，待测底物若有颜色会对检测有影响，专属性差等缺点。此外，还有报道使用离子色谱法进行亚硝酸根的检测，但该法仪器成本较高，不利于方法的普及，无法作为亚硝酸盐检测的常规手段。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种准确度、精密度、重现性及稳定性均良好的亚硝酸盐的检测方法。

技术方案：本发明的亚硝酸盐的检测方法包含以下步骤：

（1）配制对照品和供试品溶液；

（2）检测：所述检测方法具体如下，

流动相：磷酸二氢钾缓冲液-乙腈，体积比：50~65∶35~50；流速：0.4~0.5mL/min；柱温：25℃~35℃；检测波长：205~215nm；

（3）计算亚硝酸盐的含量。

进一步地，步骤（1）中对照品溶液的浓度为10~20μg/mL，供试品溶液的浓度为3~10mg/mL。

配制溶剂：取1000mL乙腈，加1000mL水，摇匀，超声，即得。

对照品溶液的配制方法：精密量取亚硝酸标准离子溶液（100μg/mL）5~10mL，置50mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（10~20μg/mL）。

供试品溶液的配制方法：供试品约150~500mg，精密称定，置于50mL量瓶中，加溶剂使溶解，再加溶剂至刻度，摇匀，作为供试品溶液（3~10mg/mL）。

进一步地，步骤（2）中检测使用的色谱柱为多模式表面化学键合相色谱柱，柱长为30~250mm，色谱柱填料粒度为1.6~5μm；使用的色谱柱更具体为Thermo Acclaim TrinityP1，柱长为150mm，柱直径为3mm，色谱柱填料粒度为3μm。

优选的色谱柱可以同步分离药物成分及其对离子，具有独特的三重表面化学作用，可实现反相、阳离子交换和阴离子交换功能，达到各组分迅速、有效分离。此外，无需离子对试剂也可有效保留亲水离子和可离子化分析物，低柱流失。

进一步地，步骤（2）流动相中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为10~30mmol/L。

进一步地，步骤（2）流动相中磷酸二氢钾与乙腈的体积比为55~65∶35~45。

进一步地，步骤（2）中检测的对照品溶液、供试品溶液进样量分别为10~20µL。