[发明专利]一种富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法

说明书

本发明公开了一种富马酸丙酚替诺福韦中L‑丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法，采用Type B封端的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸二氢钾缓冲液‑乙腈混合溶液为流动相，进行梯度洗脱。本发明检测方法准确、操作简捷，重现性好，灵敏度和专属性较好，可充分满足本品富马酸丙酚替诺福韦中L‑丙氨酸异丙酯的检测，较好的控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性较强。

技术领域

本发明属于药物分析检测技术领域，特别涉及一种富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法。

背景技术

富马酸丙酚替诺福韦是抑制前基因组RNA转录DNA的逆转录酶，直接作用与病毒复制，通过上调一系列抗病毒干扰素刺激基因来修饰共价闭环 DNA，表观基因组，控制病毒复制和刺激活自然杀伤细胞。富马酸丙酚替诺福韦在合成过程中可能残留起始物料L-丙氨酸异丙酯盐酸盐，故需对该杂质进行控制。L-丙氨酸异丙酯在普通反相色谱柱上即可分离。因此，我们选择了针以疏水作用分离为主的Type B封端的十八烷基键合硅胶为色谱柱进行分离，选择L-丙氨酸异丙酯响应较强的检测波长，并采用偏碱性的 0.02mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH8.0)-乙腈体系加大L-丙氨酸异丙酯的保留，以梯度洗脱进行本品的L-丙氨酸异丙酯的检测。

因此，发明一种富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法来解决上述问题很有必要。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法，所述富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法采用反向液相色谱法检测出富马酸丙酚替诺福韦片中的降解杂质L-丙氨酸异丙酯的含量，其色谱条件如下：

采用Type B封端的C18键合硅胶色谱柱，以磷酸二氢钾缓冲液-乙腈混合溶液体系作为流动相，进行线性梯度洗脱。

进一步的，所述流动相为流动相A和流动相B混合而成，流动相A为磷酸二氢钾缓冲液，流动相B为乙腈，流动相A和流动相B的体积百分比总量为 100％，所述流动相A为89％～91％，流动相B为9％～11％。

进一步的，所述流动相A磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.02mo l/L，pH值为7.9～8.1，优选的PH值为8.0。

进一步的，所述磷酸二氢钾缓冲液-乙腈的质量比为85:15～95:5，优选的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈的质量比为90:10，且超声溶解时间为5～10mi n。

进一步的，所述流动相洗脱方式为梯队洗脱，且线性梯度洗脱的数值如下表所示：

进一步的，所述Type B封端的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为填充剂, 色谱柱品牌为Agilent Eclipse XDB-C18。

进一步的，所述步骤S3中的TypeB封端色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，使用商品化的Agilent Eclipse XDB-C18(4.6*250mm 5μm)。

进一步的，所述反向液相色谱法中检测选用的波长为208～212nm，优选的检测波长为210nm，选用流动相的流速为1.2～1.5mL/min，优选的流速为每分钟1.3ml，选用色谱柱的温度为25～35℃，优选的柱温为30℃。

进一步的，富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯的HPLC测定方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备：取富马酸丙酚替诺福韦中L-丙氨酸异丙酯，置于量瓶中，加溶剂磷酸二氢钾缓冲液-乙腈超声溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；