[发明专利]用于检测酶末端修复能力的核酸序列、方法及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测酶末端修复能力的核酸序列，包括双链区域和非双链区域，所述非双链区域位于所述核酸序列的末端，具有末端修复能力的酶作用于所述非双链区域。一种采用上述核酸序列的酶活检测方法及试剂盒。从而提供了一种更为快速、便捷和安全的用于检测酶的检测试剂和检测。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用于检测酶末端修复能力的核酸序列、方法和试剂盒。

背景技术

近些年日益成熟的高通量测序技术(Generation Sequencing，NGS)因通量高、准确性高、灵敏性高、自动化程度高和运行低成本等突出的优势，使其应用于多个研究领域，比如无创产前检测、染色体异常检测、基因组测序、外显子测序、转录组测序、表观基因组测序、染色体三维结构测序等。二代测序的主流平台一般均采用边合成边测序(SequencingBy Synthesis,SBS)技术进行核酸测序。测序前，需要对核酸(DNA或RNA)样本进行测序文库的构建，基本流程如下：步骤A:将片段化后的DNA进行片段的末端修复，步骤B：在修复后的片段3'端加“A”碱基，步骤C：将上述DNA片段与含有测序引物结合位点的DNA接头(Adapter)连接，步骤D：通过PCR进行扩增，完成测序文库构建。在文库构建方法中通常需要采用4-6种主要的酶，以及与这些酶活性相适应的反应体系，其中任何一种酶的活性存在问题，都会对建库实验的结果产生直接的影响，以及造成不必要的时间成本和经济成本的浪费。

在测序文库构建过程中，对DNA片段具有末端修复能力的酶起到了关键作用，例如，采用具有末端修复能力的酶将片段化的DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段，此时，具有末端修复能力的酶的活性是影响末端修复的关键因素，而在DNA测序文库构建过程中，末端修复步骤是建库成功的基础步骤。

目前，对酶的活性检测需要通过同位素技术和专门仪器，但由于其对同位素和仪器的依赖而费时较多和不便于操作，同时，同位素多存在放射性，会对有机体造成不同程度的损伤。因此，亟需一种更为快速、便捷和安全的用于检测酶的，特别是对具有末端修复能力的酶的检测方法和检测试剂。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于检测酶末端修复能力的核酸序列。

1.用于检测酶末端修复能力的核酸序列，包括双链区域和非双链区域，所述非双链区域位于所述核酸序列的末端，具有末端修复能力的酶作用于所述非双链区域。

2.根据项1所述核酸序列，所述非双链区域为一个或两个。

3.根据项1所述核酸序列，所述非双链区域为一段单链核酸序列或两段非互补的单链核苷酸序列。即所述非双链区域可以以单链形式存在，也可以以非互补的双链形式存在。也即所述核酸序列可以是包含在5'-和/或3'-端具有一段突出的核苷酸序列(核苷酸单链)的核酸序列，也就是说，所述核酸序列可以是具有一个或两个粘性末端的DNA片段；或者，所述核酸序列也可以是在5'-和/或3'-端具有一段非互补序列的两条单链形成的非双链区域，如Y型DNA片段。

4.用于检测酶末端修复能力的方法，所述方法采用项1-3任一项所述核酸序列作为测试底物。

5.根据项4所述方法，包括：

采用具有末端修复能力的酶对测试底物进行末端修复，以便获得修复的核酸片段；

对所述测试底物和修复的核酸片段的特征进行检测，以便基于所述测试底物和修复的核酸片段的特征，评估具有末端修复能力的酶的活性。

6.根据项5所述方法，所述特征为双链区域的碱基数目和/或位于双链区域5'端的非双链区域的碱基数目。

7.用于检测酶对DNA片段末端修复能力的试剂盒，其包括项1-3任一项所述核酸序列。