[发明专利]一种鸡胚培养疫苗的冻干工艺

说明书

本发明属于疫苗制备技术领域，公开了一种鸡胚培养疫苗的冻干工艺。将疫苗生产种毒接种鸡胚，经培养后收获病毒液，加入蔗糖作为冻干保护剂，然后经冷冻干燥处理，得到疫苗成品；所述冷冻干燥处理的工艺条件如下：预冻干：‑20℃，4h；冻干：‑40℃，120h；第一次升温：‑20℃，8h；第二次升温：0℃，8h；第三次升温：15℃，8h；第四次升温：25℃，8h。本发明冻干工艺无需加入冻干保护剂，将原有‑40℃冻干步骤直接升温至0℃保温的过程中，增加了第一次升温至‑20℃保温8h的过程，所得冻干疫苗的形态得到了明显的改善，且疫苗效价得到了明显的提高。

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种鸡胚培养疫苗的冻干工艺。

背景技术

鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。鸡胚培养的技术比组织培养容易成功，也比接种动物的动物来源容易，无饲养管理及隔离等的特殊要求，且鸡胚一般无病毒隐性感染，同时它的敏感范围很广，多种病毒均能适应，因此，是常用的一种培养动物病毒的方法。

冻干疫苗，即利用致病微生物经传代或基因改造的方式，在不破坏原有免疫原性的基础上使该致病微生物无致病性，将失去致病性的病原微生物经扩增后将培养液放入冻干机中，经低温，增加冻干机内真空度的方法，使培养液中的水分以升华的方式分离，制成保持原有微生物免疫原性的干粉。

新型的冻干灭活疫苗，根据单品种疫苗的免疫剂量先冻干成粉状或块状，使用的时候，用相应的免疫佐剂进行现配现用，在短时间内形成固定的剂型。养殖户根据自身需求，有选择地联合使用疫苗，一来很好的解决了联苗抗原含量难以满足的问题，二来解决了传统灭活疫苗免疫次数过多、免疫剂量过大的困惑。

专利CN 103735521 A，公开了一种动物用冻干灭活疫苗及其制备工艺。灭活疫苗由疫苗抗原经灭活后，再经过真空冷冻干燥工艺获得，免疫佐剂或稀释液具有良好的乳化性能。所述的疫苗抗原为PCV-2、PRRS、流行性腹泻或流感病毒的病毒性抗原，或者为猪副嗜血杆菌、链球菌或大肠杆菌的细菌性抗原，或者为支原体、球虫或附红细胞体抗原。该专利虽然公开了冻干灭活疫苗的制备方法，但并未对冻干工艺与疫苗效价的关系进行研究。

专利CN101327323A公开了一种制备冻干甲型肝炎减毒活疫苗的冻干工艺。经过疫苗预冻、疫苗升华干燥、消除疫苗底部收缩升华、疫苗的不可见冰面升华、疫苗解析干燥等工艺步骤，制得冻干甲型肝炎减毒活疫苗。避免了冻干工艺在升华期内所造成的疫苗连续升温和温升突变现象，减少和消除疫苗感染性滴度损失较大问题，使疫苗残余水分达标，外形细腻饱满。但该专利工艺程序复杂，控制难度较高，且针对的是市购甲型肝炎减毒活疫苗，并不适用于鸡胚培养疫苗的冻干处理。

现有的鸡胚培养疫苗冻干工艺普遍存在如下问题：1、冻干条件优化不足，导致疫苗效价降低；2、冻干后制品外观质量不佳；3、需要加入复杂冻干保护剂。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种鸡胚培养疫苗的冻干工艺。本发明工艺通过对冻干温度和程序的调节，在无需加入任何冻干保护剂的情况下，可以显著改善制品外观，而且可以显著提高疫苗效价。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种鸡胚培养疫苗的冻干工艺，包括如下步骤：

将疫苗生产种毒接种鸡胚，经培养后收获病毒液，加入蔗糖作为冻干保护剂，然后经冷冻干燥处理，得到疫苗成品；所述冷冻干燥处理的工艺条件如下：

预冻干：-20℃，4h；

冻干：-40℃，120h；

第一次升温：-20℃，8h；

第二次升温：0℃，8h；

第三次升温：15℃，8h；