[发明专利]一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法在审
| 申请号： | 202011600913.9 | 申请日： | 2020-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN112763621A | 公开（公告）日： | 2021-05-07 |
| 发明（设计）人： | 范志鸿 | 申请（专利权）人： | 徐州立兴佳正医药科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京淮海知识产权代理事务所(普通合伙) 32205 | 代理人： | 李妮 |
| 地址： | 221000 江苏省徐州市泉*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 联用 测定 血浆 中达泊西汀 浓度 方法 | ||
1.一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：
(1)血浆样本预处理：
血浆以K2EDTA为抗凝剂，以达泊西汀-d7为内标；于96深孔板中精密加入50μL的血浆样本，加入15μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入15μL的0.03ng/μL的内标达泊西汀-d7溶液，混匀后加入500μL的混合有机溶剂Ⅰ于96深孔板中，涡旋混合10min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液100μL至装有500μL混合有机溶剂Ⅱ的96深孔板中，混合有机溶剂Ⅰ为乙腈：甲酸按照体积比100：0.1混合得到的混合物，混合有机溶剂Ⅱ为水：乙腈：甲酸按照体积比75：25：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；
(2)试样测定：
取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中达泊西汀和内标达泊西汀-d7的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的达泊西汀浓度；
液相色谱测定条件为：色谱柱为InfinityLab Poroshell 120EC-C18，2.7-Micron，柱规格为3.0×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积百分比100：0.1：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.1混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积百分比90：10混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.5mL/min，进样量为10μL，分析时间3min；
质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为45Psi，辅助加热气压力为50Psi，气帘气压力为45Psi，碰撞气压力为8Psi，达泊西汀和内标达泊西汀-d7的去簇电压均为150eV；达泊西汀和内标达泊西汀-d7的碰撞室入口电压均为12eV；达泊西汀和内标达泊西汀-d7的碰撞电压均为35eV；达泊西汀和内标达泊西汀-d7的碰撞室出口电压均为15eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z 306.0→m/z 157.1，其为达泊西汀；和m/z 313.1→m/z164.1，其为达泊西汀-d7。
2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为：
3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中达泊西汀浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以达泊西汀和内标达泊西汀-d7的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的达泊西汀的浓度。
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