[发明专利]一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法

说明书

本发明公开了一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为特拉唑嗪的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为1～200ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中特拉唑嗪的浓度。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的测定方法，特别涉及一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法。

背景技术

盐酸特拉唑嗪片口服给药适用于轻度或中度高血压治疗，可与噻嗪类利尿剂或其他抗高血压药物合用，还可以在其他药物不适用或无效时单独使用。盐酸特拉唑嗪片主要降低舒张压。盐酸特拉唑嗪片口服给药还适用于良性前列腺增生引起的症状治疗。

虽然到目前为止还没有建立起盐酸特拉唑嗪降压作用的确切机理，但外周血管的松弛主要是由于突触后α肾上腺素受体的竞争拮抗作用引起的。特拉唑嗪开始时产生缓慢的降低血压作用，随后发挥持续抗高血压效应。临床经验表明血浆总胆固醇降低2～5％和低密度脂蛋白胆固醇(LDLc)+极低密度脂蛋白胆固醇(VLDLc)结合部分降低3～7％与特拉唑嗪治疗剂量有关。临床试验中可观察到服用盐酸特拉唑嗪后总胆固醇及结合低密度和极低密度脂蛋白的血浆浓度轻度降低。合用其它能升高血浆总胆固醇的抗高血压药未见总胆固醇的升高。研究表明α1肾上腺素受体的拮抗作用有益于改善慢性膀胱阻滞患者(如良性前列腺增生[BPH])的尿道功能。BPH症状主要是由前列腺增生及尿道出口和前列腺平滑肌阈值增加(主要由α1肾上腺素受体调节)引起。体外试验表明盐酸特拉唑嗪可拮抗去氧肾上腺素诱导的人前列腺组织的收缩。在临床试验中还显示了盐酸特拉唑嗪可以改善BPH患者的尿道功能和症状。

目前，现有关于特拉唑嗪测定方法的速度、精度、灵敏度、选择性均有待提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法，该方法可提高检测的灵敏度、精度、选择性和速度。

为实现上述目的，本发明提供一种液质联用测定血浆中特拉唑嗪浓度的方法，血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：

(1)血浆样本预处理：

血浆以K₂EDTA为抗凝剂，以特拉唑嗪-d8为内标；于96深孔板中精密加入50μL的血浆样本，加入5μL体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入10μL的0.1ng/μL的内标特拉唑嗪-d8溶液，混匀后加入500μL的甲醇，涡旋混合10min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液50μL至另一装有450μL混合有机溶剂的96深孔板中，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；其中：混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比40：60：0.2：0.2混合得到的混合溶液；

(2)试样测定：

取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中特拉唑嗪和内标特拉唑嗪-d8的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的特拉唑嗪浓度。

液相色谱测定条件为：色谱柱为Synergi^TM Polar-RP柱规格为2.1×50mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.2：0.2混合得到的混合物；流动相B为甲醇：甲酸：1M醋酸铵按照体积比100：0.2：0.2混合得到的混合物；洗液为甲醇：水按照体积比70：30混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.5mL/min，进样量为10μL，分析时间4.3min；