[发明专利]一种通过全血提取DNA进行PCR扩增测序分析方法

说明书

本发明公开了一种通过全血提取DNA进行PCR扩增测序分析方法，1)所需DNA样本制备，2)PCR扩增与分析，3)叶酸代谢信息获得，通过软件进行基因分型PCR实验，获得实验结果，得到叶酸代谢信息，本发明操作步骤简单，缩短了检测时间，提高了检测效率，提升了检测的准确性；提供了有效的信息，从而对提高了对叶酸代谢的准确度。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种通过全血提取DNA进行PCR扩增测序分析方法。

背景技术

叶酸(蝶酰单谷氨酸)是指具有相关生物活性的一类同效维生素，由蝶啶、对氨基苯甲酸和1个或多个谷氨酸结合而成，即由a-氨基-4-羟基蝶啶与对氨基苯甲酸相连接，再以-NH-CO-键与谷氨酸连接组成，其不同的辅酶形式可以作为一碳单位的供体或载体而发挥作用，主要参与以下几类反应：①蛋氨酸合成；②嘌呤和嘧啶的合成；③丝氨酸和甘氨酸的相互转化；④组氨酸的降解。大量的科学研究表明，叶酸摄入绝对或相对的缺乏，是引起高同型半胱氨酸血症的直接原因。高同型半胱氨酸血症可能导致新生儿神经管缺陷(NTDs)、唐氏综合症(DS)、先天性心脏病(CHD)、唇腭裂；孕妇妊娠期高血压、早产、自发性流产。

发明内容

本发明的提供一种通过全血提取DNA进行PCR扩增测序分析方法。

本发明的方案是：

一种通过全血提取DNA进行PCR扩增测序分析方法，包括下列步骤：

1)所需DNA样本制备，通过全血提取样本DNA，获得的样本DNA后，置于-20℃～4℃中保存待用；

2)PCR扩增与分析，通过步骤1)获取的样本DNA在PCR管中构建反应体系，然后送入PCR扩增仪器中扩增，PCR循环程序设置，完成后获得样本的的信息；

3)叶酸代谢信息获得，通过软件进行基因分型PCR实验，获得实验结果，得到叶酸代谢信息。

作为优选的技术方案，所述全血提取样本DNA如下所示：

1-mL Tip头剪去尖头，插移液器上，伸入采血管中反复吹打全血3～4次，沉淀的白细胞充分悬浮，转移全血至EP管中，加MGS裂解液，加蛋白酶K混匀，在60℃的水浴锅中加热10min～15min，混匀次数大于2次；

从水浴锅中取出EP管，将EP管内溶液全部倒入离心吸附柱中，吸附柱放入收集管内，8000rpm，离心1min，取出吸附柱，倒掉收集管中废液；

向吸附柱中加入清洗液8000rpm，离心30s，取出吸附柱，倒掉收集管中废液；

漂洗处理两次，完成后取出吸附柱，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中，12000rpm，离心1min，除去残留的乙醇；

将吸附柱置于新的1.5ml离心管中室温环境干燥2-3min；向吸附柱靠近吸附膜中央悬空滴加60℃的洗脱液ET，12000rpm，离心1-2min，离心管内收集到液体即为样本DNA溶液，盖盖子后轻拨离心管内液体混匀。

作为优选的技术方案，所述漂洗处理为向吸附柱中加入漂洗液Wash，8000rpm，离心30s，取出吸附柱，倒掉收集管中废液。

作为优选的技术方案，所述步骤2)中反应体系如下：

作为优选的技术方案，所述步骤2)中循环中变性温度改为92℃。