[发明专利]一种LILRB4和B7-H3双靶向的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明涉及嵌合抗原受体领域，公开了一种嵌合抗原受体。所述嵌合抗原受体包含依次连接的抗LILRB4单链抗体、抗B7‑H3单链抗体、人CD8铰链跨膜区、人4‑1BB胞内区、人CD3ζ胞内区、人P2A肽和人IFN全长。细胞学实验结果表明，表达所述嵌合抗原受体的T细胞，对肿瘤细胞的杀伤效果优于单靶点同类型CAR‑T。动物实验结果表明，表达所述嵌合抗原受体的T细胞，可以显著延长动物的生存率，效果优于单靶点同类型CAR‑T。本发明还公开了一种LILRB4和B7‑H3双靶向的嵌合抗原受体的应用，用于制备治疗急性髓细胞白血病的药物。

技术领域

本发明涉及嵌合抗原受体技术领域，尤其是涉及一种LILRB4和B7-H3双靶向的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞治疗由于在血液肿瘤中取得了显著疗效，正在成为一种富有前景的免疫治疗策略。CAR-T细胞指的是一种经过人工基因改造的在细胞表面表达嵌合型抗原受体(CAR)的T细胞。CAR是CAR-T的核心部件，赋予T细胞以组织相容性抗原(HLA)非依赖的方式识别肿瘤表面肿瘤相关抗原(TAA)的能力。因此，CAR-T细胞在体内能特异性靶向表达有TAA表面标记的肿瘤细胞，并通过激活T细胞免疫反应杀伤肿瘤细胞。2010年，首例B细胞淋巴瘤患者接受靶向CD19的CAR-T细胞治疗并取得了令人振奋的积极效果。此后，越来越多的研究组通过临床试验证实了CAR-T技术治疗B细胞血液肿瘤的安全性和有效性。

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是成人中最常见的、死亡率最高的一类白血病，在治疗上仍面临着挑战。目前，急性髓细胞白血病的治疗仍以化疗为主，病人达到完全缓解后桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)。该方法可以使部分AML患者获得完全缓解，对于接受allo-HSCT的AML患者，5年无病生存期(Disease-free survival，DFS)可达到40-50％。但是，大约有43％的患者接受首次化疗后复发，而复发患者仅有一半能获得完全缓解，复发情况下的存活率低于15％。再者，有18％的患者在经历多次化疗诱导后仍无法达到完全缓解。

目前世界范围内有记录的CAR-T相关临床试验已超过1000项，并且有三款CAR-T产品被FDA批准上市，分别用于治疗急性B细胞白血病(B-ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和套细胞淋巴瘤(MCL)。然而，由于髓系血液肿瘤的异质性，目前CAR-T疗法在AML的治疗方面的进展情况并不理想。已经开展的靶向CD33，CD123等靶点的CAR-T疗法，在临床应用中普遍出现不同程度的造血系统损害。究其原因，主要是以上所述靶点均在正常造血祖细胞中有不同程度表达，所以CAR-T细胞在体内的持续存留可能对于造血系统造成不可逆转的脱靶毒性。

CAR-T细胞治疗在临床实践中，另一个亟待解决的重要问题是复发。在接受CD19CAR-T治疗并获得完全缓解的急性B淋巴细胞白血病患者中，大约有30-50％的患者最终复发，其中大多数患者在首次治疗后1年内复发。复发分为两种情况，CD19阳性肿瘤复发及CD19阴性肿瘤复发。接受CD19 CAR-T治疗的病例中，超过60％的复发是CD19阴性，即由于肿瘤细胞丢失CD19表面抗原引起。

因此，本技术领域亟需开发一种既能追杀发生抗原逃逸的急性髓系白血病肿瘤细胞又不会对造血系统造成不可逆转的脱靶毒性的CAR-T产品。

发明内容

本发明的目的之一在于提供了一种LILRB4和B7-H3双靶向的嵌合抗原受体。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种LILRB4和B7-H3双靶向的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列包括：

依次连接的抗LILRB4单链抗体、抗B7-H3单链抗体、人CD8铰链跨膜区、人4-1BB胞内区、人CD3ζ胞内区、人P2A肽和人IFN蛋白肽；或

具有所述氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有相似生物活性的嵌合抗原受体。