[发明专利]一种抗猪圆环病毒2型高免血清及其制备方法

说明书

本发明属于生物血清制备技术领域，具体涉及一种抗猪圆环病毒2型高免血清，并进一步公开其制备方法。本发明所述的抗猪圆环病毒2型高免血清，其以保藏编号为CGMCC No 3064的猪圆环病毒2型病毒DBN‑SX07株制备的灭活疫苗为免疫原，并从免疫猪中分离血清制得，其物理性状良好，无细菌、霉菌和支原体生长，无外源病毒污染，抗体效价1：2000以上，可以稳定保存36个月，具有纯度高、特异性高级稳定性强的优势，可作为体外检测的标准物质。

技术领域

本发明属于生物血清制备技术领域，具体涉及一种抗猪圆环病毒2型高免血清，并进一步公开其制备方法。

背景技术

猪圆环病毒（Porcinecircovirus，PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一，现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2，PCV1为非致病性的病毒，PCV2为致病性的病毒。其中，猪对PCV2具有较强的易感性，感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征、皮炎与肾病综合征等相关疾病的首要致病因子，给养猪业造成巨大的经济损失。据报道，猪圆环病毒2型（PCV2）在世界范围内广泛分布，血清学和病原学调查己证实全世界范围内许多国家和地区的猪群均存在PCV2感染，几乎100%的商品化养猪场感染过PCV2，严重影响世界养猪业的发展。

我国在2000年首次报道了猪圆环病毒病，至今PCV2已在我国猪群中流行二十年。PCV2通常与其他多种病原混合感染，引发猪群发生严重的死亡率，较严重的地区暴病时死淘率高达40%。大量的流行病学研究表明，我国猪群中PCV2感染十分普遍，PCV2抗体阳性率高达80%以上，被调查的猪场阳性率高达100%。在2001-2012年期间，中国分离了258株PCV2株，其中有242株序列均为PCV2b基因亚型，约占比93.8%，证明我国近几年流行的毒株为PCV2b 亚型。

目前，免疫接种猪圆环病毒2型灭活疫苗是防控PCV的重要措施之一。通常在疫苗免疫后，效力实验的评价方法中，猪免疫攻毒实验是最有效的手段。但是，通常实验猪筛选较为困难，且人工费、饲养费成本高，实验时间也长达两个月。因此，寻找一种纯度高、特异性强、稳定性好的检测抗体，以体外相对效力检测方法代替动物攻毒实验，以实现便捷经济的体外效力检测，对于种猪圆环病毒2型灭活疫苗的接种具有积极的意义。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种纯度高、特异性强、稳定性好的抗猪圆环病毒2型高免血清检测抗体，可用于猪圆环病毒2型疫苗的体外评价；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述抗猪圆环病毒2型高免血清的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种抗猪圆环病毒2型高免血清，其以保藏编号为 CGMCC No 3064的猪圆环病毒2型病毒DBN-SX07株制备的灭活疫苗为免疫原，并从免疫猪中分离血清制得。

具体的，所述灭活疫苗为将所述猪圆环病毒2型病毒DBN-SX07灭活与油佐剂乳化制备而成。

本发明还公开了一种制备所述抗猪圆环病毒2型高免血清的方法，包括如下步骤：

（1）感染免疫：以保藏编号为 CGMCC No 3064的猪圆环病毒2型病毒DBN-SX07株的灭活疫苗为免疫原进行健康猪的感染免疫；

（2）采血：于免疫完成后28天检测血清抗体效价，当抗体效价达到1：2000以上时即为合格，采猪全血，备用；

（3）血清分离：将采集的猪全血进行恒温培养，经固液分离收集血清，备用；

（4）将收集的血清样品离心并收集上清液，采用protein A亲和柱进行纯化，收集目的峰位置的纯化样品，即得。