[发明专利]胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法及胶体金侧流层析试剂盒

说明书

本发明属于毒素检测领域，涉及胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法及胶体金侧流层析试纸和试剂盒。该方法包括以下步骤：(1)将H1‑AuNPs‑FAM抗体、FAM抗体‑AuNPs与含有蓖麻毒素的待测样品孵育；H1的序列如SEQ ID NO：1所示；AuNPs的颗粒尺寸为2‑10nm；(2)将步骤(1)孵育所得混合液滴加至侧流层析试纸上；所述侧流层析试纸包括样品垫、检测区、吸收垫和带塑料背卡NC膜；所述检测区包括T线结合区、C线结合区；所述T线结合区设置有检测线，所述C线结合区设置有控制线；(3)根据检测线和控制线上金纳米粒子的显色值判读检测结果。本发明建立了检测蓖麻毒素的胶体金侧流层析方法，该方法无需制备相应抗体，且操作简单，可满足现场检测的需求。

技术领域

本发明属于毒素检测领域，具体地，涉及一种胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法，以及一种快速检测蓖麻毒素的胶体金侧流层析试剂盒。

背景技术

蓖麻，拉丁学名Ricinus communis L.，原产于非洲东北部的索马里和肯尼亚，在全球热带地区均有广泛分布。蓖麻植株的茎、叶或蓖麻籽实中含有有毒物质，主要包括蓖麻毒素、蓖麻碱、蓖麻反应原等。蓖麻毒素(RT) 经化学提纯后能够溶于弱酸或水中，且理化性质较为稳定。从化学结构而言，蓖麻毒素是由A、B两条肽链所组成的高毒性植物蛋白。活性蓖麻毒蛋白通过B链介导内吞作用进入真核细胞，随后A链从28S rRNA中纯化出特定的腺嘌呤，从而诱导蛋白质合成失败，并最终激活细胞死亡途径。

蓖麻毒素作为剧毒蛋白质，其毒性高于氰化物6000倍。蓖麻毒蛋白由于其强毒性和易获得性，不但吸引科研人员的兴趣，同时也成为恐怖分子的利器，著名的马尔科夫毒伞案就是例子。开发灵敏、高效的检测手段是应对威胁的主要措施。传统的检测技术主要有放射免疫技术、酶联免疫吸附技术(ELISA)、高效液相色谱、免疫PCR、胶体金标记技术等。但这些检测方法需要依托昂贵仪器及专业技术人员进行，不利于在现场使用，限制其进一步应用和推广。

胶体金免疫层析法(colloidal gold immune-chromatographic assay， GICA)是20世纪末研发的一种利用胶体金纳米粒子作为显色元件，与免疫识别技术和层析技术相结合的一种现场、快速检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性识别结合，导致胶体金在侧向层析试纸条上出现颜色变化。利用侧向层析试纸条技术，已经实现了快速测定水中汞离子、以及通过信号放大实现超敏检测水产品中甲霜磷等。

蓖麻毒素毒性强、易获得，是潜在的生物恐怖战剂，因此，亟待建立快速检测蓖麻毒素的方法，以保障国家公共安全。

发明内容

本发明的目的是提供胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法及胶体金侧流层析试剂盒。

为了实现上述目的，本发明的第一方面提供一种胶体金侧流层析法快速检测蓖麻毒素的方法，包括以下步骤：

(1)将H1-AuNPs-FAM抗体与含有蓖麻毒素的待测样品孵育；H1的序列如SEQ IDNO：1所示；AuNPs的颗粒尺寸为2-10nm；

5’-FAM-GAC CTA CTT ATG AAA AAA AAA AAA TTA TAT CTA TCT- Biotin-3’(SEQID NO：1)

(2)将步骤(1)孵育所得混合液滴加至侧流层析试纸上；所述侧流层析试纸包括样品垫、检测区、吸收垫和带塑料背卡NC膜；所述检测区包括T线结合区、C线结合区；所述T线结合区设置有检测线，所述C线结合区设置有控制线；链霉亲和素和抗FAM抗体的二抗分别固定在所述检测线和控制线上；

(3)根据检测线和控制线上金纳米粒子的显色值判读检测结果。

根据本发明，H1-AuNPs-FAM抗体可由H1与AuNPs-FAM抗体孵育获得。

本发明中的所述侧流层析试纸可商购获得，也可自制得到。