[发明专利]一种草莓组培继代培养培养基及制备方法

说明书

本发明涉及一种草莓组培继代培养培养基及其制备方法，所述草莓组培继代培养培养基，包括基础培养液和抑菌培养物，所述基础营养液包括大量元素、微量元素，所述抑菌培养物包含芦丁。在草莓组培培养基的配方中加入芦丁对草莓组培过程中引入的细菌具有一定的抑菌活性，同时芦丁还可为组培草莓苗的生长提供碳源从而促进草莓苗的生长。

技术领域

本发明涉及农作物培养基配方及制备方法，尤其涉及一种草莓组培继代培养的培养基配方及制备方法。

背景技术

草莓属蔷薇科、草莓属、多年生草本植物。草莓果鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香，且富含维生素C、维生素A、胡萝卜素等，有较高的营养价值和药用价值，市场需求量大。草莓苗的生产则是利用植物组织培养这一技术。植物组织培养又称植物克隆，指通过无菌操作把植物体内的外植体接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境下进行离体培养的一套技术与方法，近年来这项技术应用十分广泛尤其在作物育种，马铃薯、苗木及花卉的脱毒和快繁等方面更具其他技术手段所无法比拟的优势。

虽然草莓组织培养的技术并不难，但对一些技术环节的要求却十分严格，稍有疏忽便会影响实验进程，甚至导致整个实验的失败，而对于利用组织培养进行工厂化育苗的单位如发生污染情况，轻者影响繁殖计划，影响当季的生产，重者造成珍贵品种的丢失，组织室体系的瘫痪。因而，解决组培过程中的污染问题是非常必要的。目前，国内外专家在这方面也做了不少的研究，但都是从分析污染的原因从而进行相应的防控措施，但是从培养基配方的方面来进行污染的控制主要是加入一些药剂如青霉素、多菌灵等。

芦丁是植物体内一种重要的天然黄酮类化合物，具有提高植物耐胁迫能力、抗氧化、淸除自由基和抑菌等黄酮类化合物的重要功能。在临床用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢和急性出血性肾炎。近年来,芦丁的应用研究也开始兴起。

专利CN202010558289.4公开了一种用于香石竹花药培养的分化培养基，该专利为达到促进愈伤组织分化的目的，对分化培养基，不仅在常规的大量元素、微量元素、铁盐等浓度上做了调整，还添加了维生素E、芦丁、核苷酸等成分，采用2-IP、NAA、KT的激素组合，这些成分对愈伤组织的生长发育、器官分化都具有正向效应，从而，平均绿苗分化率最高可达40.94％。但是该专利没有披露芦丁在其中的具体作用，该培养基也不适用于组织的继代培养。

专利CN201510470099.6公开了一种在培养基中添加芦丁促进益生菌生长的方法，该方法通过将益生菌菌种(鼠李糖乳杆菌)接种到添加有芦丁的改良MRS乳酸细菌培养基(葡萄糖2％、蛋白胨2％、牛肉膏1％、酵母膏0.5％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.2％、柠檬酸氢二铵0.2％、硫酸镁0.025％、硫酸锰0.005％、吐温-80 0.3％，pH 7.0)基质中进行发酵，每升发酵培养基中添加1g-5g芦丁(纯度99％)，该方法能够显著提高发酵液中益生菌的发酵速度和益生菌的活菌数；益生菌发酵生长24h得到的益生菌发酵液的最大活菌数可达到约109CFU/mL。该专利没有披露芦丁的作用原理，研究结果表明芦丁并不对所有细菌都表现出抑菌活性。

山东农业大学徐晓楠发表了硕士论文《植物激发子芦丁诱导植物对三种细菌性病害抗性研究》，初步研究探讨了芦丁对植物病原细菌的抑制活性和芦丁作为激发了在诱导植物抗病性中的作用。在芦丁的抑菌活性方面，芦丁对青枯病原菌青枯假单胞杆菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、丁香假单胞菌、番茄致病变种具有广谱抑菌活性，而且随着芦丁浓度增大，活性增强。芦丁对不同病原和同一病原的不同生理小种的抑菌活性不同。芦丁诱导植物抗病性方面，芦丁在低浓度时诱导作用较低，随着浓度升高诱导作强，达到一定浓度时诱导作用不再增强，芦丁可以激发植物对细菌性病害的抗性，另外，芦丁也可能激活了活性氧的产生。但是，芦丁对植物病原真菌的体外抑菌活性，芦丁诱导植物对真菌性病害和病毒病的抗性研究，芦丁在诱导植物抗病性中的具体作用位点以及结受体和代谢过程等问题还需要进一步研究。

目前，芦丁在草莓苗组培培养基方面的研究和应用尚未见报道，尤其是草莓组培的继代培养方面面临的细菌污染的防治方面。

发明内容