[发明专利]一种降低菌株胆固醇能力的方法

说明书

本发明提供了一种降低菌株胆固醇能力的方法，属于微生物领域。本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法包括如下步骤：将菌株加入到培养基中，并加入胆固醇和\或牛胆汁进行培养。因为乳酸脱氢酶是催化丙酮酸转化为乳酸的关键酶，如果阻断这一转化途径，培养基的pH值会发生变化，本发明基于这一假设通过敲除ldh关键酶基因，再结合敲除bsh基因的菌株进行一系列实验验证，从而得出培养基中的pH值会对菌株的降胆固醇能力产生一定的影响。所以本发明通过对比野生型菌株L.plantarum AR113和敲除菌株的生长特性、培养基pH值及其降胆固醇能力的差异，来佐证BSH和培养基pH值对益生菌L.plantarum AR113降解胆固醇的影响。

技术领域

本发明涉及一种微生物领域，具体涉及一种降低菌株胆固醇能力的方法。

背景技术

植物乳杆菌体外降胆固醇的能力受到多种因素的影响，并且不同菌株间表现出差异性。近年来，在体外高效降解胆固醇的益生菌菌株的研究中，主要作用是源于其产生多量或高活性的BSH，即BSH在体外降胆固醇方面发挥重要作用，如乳酸乳球菌亚种KS4和P1、嗜热链球菌Tx、植物乳杆菌FB003、植物乳杆菌H13和植物乳杆菌Lp91等。

乳酸脱氢酶(LDH)是催化丙酮酸转化为乳酸的关键酶，如果阻断这一转化途径，培养基的pH值会发生变化，基于这一假设，还没有实验对这一假设进行验证。胆固醇摄入量过高，会引起冠心病、动脉粥样硬化等心脑血管疾病，严重威胁人体的健康，增加病亡率。研究表明益生菌对人体健康的有益作用之一是降低胆固醇。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种降低菌株胆固醇能力的方法。

本发明提供了一种降低菌株胆固醇能力的方法，具有这样的特征，包括如下步骤：将菌株加入到培养基中，并加入胆固醇和\或牛胆汁进行培养。

在本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法中，还具有这样的特征：其中，菌株为敲除ldh基因的菌株。

在本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法中，还具有这样的特征：其中，敲除ldh基因的菌株的制备方法包括：步骤1，制备菌株感受态细胞；步骤2，将质粒导入菌株感受态细胞中，得含质粒的菌株感受态细胞；以及步骤3，构建ldh敲除质粒并电转入含质粒的菌株感受态细胞中，涂布、培养24-48h，得敲除ldh基因的菌株。

在本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法中，还具有这样的特征：其中，涂布在红霉素和氯霉素双抗性的平板上进行。

在本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法中，其特征在于：其中，培养基为MRS培养基、含有胆固醇的MRS培养基、含有牛胆汁的MRS培养基或含有胆固醇和牛胆汁的MRS培养基中的任意一种。

在本发明提供的降低菌株胆固醇能力的方法中，其特征在于：其中，菌株为植物乳杆菌AR113。

发明的作用与效果

根据本发明所涉及的降低菌株胆固醇能力的方法，因为包括如下步骤：将菌株加入到培养基中，并加入胆固醇和\或牛胆汁进行培养。因为乳酸脱氢酶是催化丙酮酸转化为乳酸的关键酶，如果阻断这一转化途径，培养基的pH值会发生变化，基于这一假设通过敲除ldh关键酶基因，再结合敲除bsh基因的菌株进行一系列实验验证，从而得出培养基中的pH值会对菌株的降胆固醇能力产生一定的影响。所以本发明通过对比野生型菌株L.plantarum AR113和敲除菌株的生长特性、培养基pH值及其降胆固醇能力的差异，来佐证BSH和培养基pH值对益生菌L.plantarum AR113降解胆固醇的影响。

附图说明

图1是本发明的实施例1中ldh基因敲除的验证；

图2是本发明的实施例3中菌株在4种培养基中的生长曲线；

图3是本发明的实施例4中菌株在4种培养基中的pH值；以及