[发明专利]一种多抗性水稻品种的筛选方法

说明书

本发明公开了一种同时抗水稻稻瘟病、纹枯病、白叶枯病三种病害的多抗性水稻品种筛选方法，包括在同一水稻植株上三种病害的人工接种时间、接种顺序、接种方法、调查方法等。该技术准确度高、重复性好，能有效的减少样本量、缩短筛选时间，同时为加速育种进程，推广多抗性水稻品种提供技术支撑。

技术领域

本发明属于农业植保领域，具体涉及的同一水稻植株接种不同病原菌，筛选多抗性水稻品种，适用于多抗性水稻品种的筛选及利用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，全球有近一半的人口以大米为食。水稻稻瘟病、纹枯病、白叶枯病是世界公认的水稻上最重要的三大病害，每年都有不同程度的发生，给农业生产带来严重的损失。

传统的化学防治为农业生产做出了巨大的贡献，但是化学农药的长期大量的使用造成病原菌产生抗药性、环境的污染等问题，而其在大米和水体中的残留更是直接威胁着人类的健康。种植和选育抗病品种能有效的降低病害的流行和发生。有利于粮食作物的安全生产，实现连年稳产、高产，因此充分发挥水稻品种自身抗病性优势减少病害的发生，是相对经济、有效、生态的防控措施。农业部也出台了主要农作物高感病品种“一票否决制”，以阻止抗性差的品种在生产上应用，因此抗病育种和抗病性品种是育种家培育新品种的目标。

目前水稻的育种一般只针对一种病害筛选抗病品种或资源，而且多采用田间自然选育，每年因气候的不同，病害发生的种类和严重程度不同，很难筛选出真抗性的水稻品种或资源，筛选获得同时抗多种病害的水稻品种更是难上加难，因此延长了育种周期和多抗性水稻品种的推广和应用。

发明内容

本发明的目的，是提供一种筛选多抗性水稻品种的方法，其特征在于它是在同一水稻植株上，先接种纹枯病菌，然后接种白叶枯病菌，最后接种稻瘟病菌；包括：

（1）病原菌的分离：采集水稻纹枯病、稻瘟病典型病样，用75%酒精消毒处理病组织30s，然后用无菌水冲洗干净，将处理后的病组织放于含有1%（w/w）阿米卡星注射液的PDA固体培养基（马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml，分装在250ml三角瓶中）中培养；菌落长满后，将稻瘟病菌菌落上产生的分生孢子用无菌水冲洗，配成含量10⁵/ml孢子悬浮液，纹枯病菌菌落直接使用；采集的水稻白叶枯典型病样，用75%酒精消毒处理病组织30s，然后用无菌水冲洗干净，置于协本氏培养基（马铃薯300g，硝酸钙0.5g，磷酸氢二钠2.0g，蔗糖15g，水1000ml，琼脂20g，PH6.8-7.0）上，长出菌落后，用无菌水将菌脓洗下，形成10⁵cfu/ml的菌悬液；；

（2）水稻纹枯病的人工接种方法：将生长在PDA平板上的纹枯病菌，用打孔器打成直径为0.5cm的菌饼，于水稻分蘖前期，将一个菌饼贴于水稻叶鞘内侧，用尼龙草固定，保证菌饼与水稻植株的密切接触，并做好标记，一个分蘖贴一片；

（3）水稻白叶枯病的人工接种方法：于水稻分蘖后期用医用剪刀沾取菌悬液后减去水稻叶片尖端1cm的叶片；

（4）水稻稻瘟病的人工接种方法：于水稻孕穗期用10ml的一次性注射器，吸取含有稻梨孢的含量10⁵/ml的孢子悬浮液，每个穗子注射2ml。

本发明进一步公开了多抗性水稻品种筛选方法在有效减少样本量、缩短筛选时间方面的应用。实验结果证实在同一水稻植株上分别接种水稻纹枯病、稻瘟病、白叶枯病与同一品种不同的水稻植株分别接种以上三种病害，水稻品种对三种病害的抗病性不变。

本发明所述的多抗性水稻资源的筛选方法指的是可以在同一水稻植株上分别接种纹枯病、稻瘟病、白叶枯病，来考察该品种对三种病害的抗病性。

本发明更加详细的描述如下：

1、水稻纹枯病人工接种及调查方法：