[发明专利]一种白芨多糖的制备和应用

说明书

本发明涉及止血药物技术领域，尤其是免疫调节和促凝血剂方面的应用。在本发明中，采用热水法提取白芨多糖、用Sevag法纯化、DEAE‑52纤维素分离，氯化钡‑明胶浊度法、紫外光谱法、红外光谱法和X射线光电子能谱法检测白芨多糖中含有硫酸基，液相色谱法测定单糖组成和分子量；白芨多糖通过缩短活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间和提高纤维蛋白原含量，说明白芨多糖有促凝血的能力。用RAW 264.7细胞体外MTT法、中性红实验和一氧化氮的产生评估免疫活性，结果白芨多糖虽然没有促进细胞增殖，但通过增加胞饮能力和一氧化氮的产生证明了其免疫调节活性。所制备的白芨多糖是一种潜在的具有免疫调节作用的促凝血作用的多糖，具有良好的市场开发应用前景。

技术领域

本发明涉及止血药物技术领域，尤其是免疫调节和促凝血剂方面的应用。

背景技术

白芨是一种多年生草本植物，主要分布于中国广西省、贵州省、云南省、四川省等。白芨不但具有纯天然植物具备的优良的化学相容和可降解性，繁多的药理活性在天然药物临床的应用上也具有非常广阔的市场和应用的前景。

《中国药典》(2020年版)指出白芨具有止血、消炎、促进组织再生、呕血、咯血、消肿等作用。一些成份，如三萜、皂苷、甾体类化合物、类黄酮、多糖和多酚已从白芨中分离出来。白芨多糖(BSP)是其主要的生物活性成分之一，白芨多糖具有各种有益的活性，包括伤口愈合、止血、抗血管生成、抗氧化、抗炎、抗肝脏、抗利尿和免疫调节特性。

王博等人经白芨多糖BSPI-A的分离纯化及结构研究表明纯化的BSP具有止血作用，高温有利于多糖的溶解与浸出，故白芨多糖采用水热回流提取，热水提取的BSP由甘露糖和葡萄糖组成，摩尔比为3:1，分子量为135 kDa的葡甘露聚糖聚合物。单糖的连接方式为β键连接，存在酰基的修饰。核磁波谱图的结果表明白芨多糖是由β-1,4-甘露糖和β-1,4-葡萄糖组成。

在多糖的化学成分评价和定量分析方面，X射线光电子能谱（XPS）是一种表面灵敏的定量谱学技术,可以用于分析材料中存在的元素（除氢、氦）构成以及元素的化学态和电子态,是研究原子、分子及固体材料的一种有力工具，越来越受到人们的重视。通过XPS分析，王军龙等人证实了艾叶多糖中含有丰富的-SO₃基团。

有人提出了“免疫血栓”的概念，即免疫系统利用凝血因子使淋巴液凝固，保护淋巴液免受微生物入侵。经研究发现BSPF2能显著诱导Balb/C小鼠脾脏细胞增殖，并表现出免疫活性。董莉等人经深入研究后还发现了白芨多糖能缩短活化部分凝血细胞激酶活化时间，促进了血小板的快速聚集和对血小板的调节，发挥其止血作用。

针对上述问题，本专利采用热水提取BSP, DEAE-52纤维素色谱法分离BSP，通过紫外-可见光谱(UV-vis)、红外光谱（IR）、X射线光电子能谱法（XPS）和高效液相色谱(HPLC)测定其理化特性。此外，还进行了体外促凝血和免疫调节功能等生物活性测定。发明内容可为BSP的综合利用提供科学依据。

发明内容

鉴于现有技术所存在的问题我们主要提供一种制备简单、结构新颖、疗效高，在医药市场有一定竞争力的多糖制备方法及其应用。

一种如权利要求1所述的促凝剂，其特征在于按如下步骤进行：

1.选取10月份云南采摘的白芨Bletilla striata新鲜块茎洗净去皮切片，切片厚度为5mm，提取温度为70℃，提取时间为1 h，料液比为30∶1(mL/g)，同样条件提取2次，将2次提取液合并、过滤，减压旋转蒸发浓缩，在4℃条件下，用体积95%乙醇进行两次沉淀，冷冻干燥，得到粗BSP粉末，用Sevag法纯化（氯仿：正丁醇=1:4，样液与试剂体积比为2:1），DEAE-52纤维素柱层析用不同浓度的氯化钠溶液(0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和0.7 M)）梯度洗脱，分别命名为BSP-1、BSP-2、BSP-3、BSP-4。