[发明专利]一种检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合及其应用

说明书

本发明提供了一种检测SARS‑CoV‑2病毒的引物探针组合及其应用，所述检测SARS‑CoV‑2病毒的引物探针组合特异性扩增并检测SARS‑CoV‑2病毒的ORF1ab基因、N基因或E基因中的任意一种或至少两种的组合。本发明还提供了一种基于微流控数字PCR的SARS‑CoV‑2病毒联合检测试剂盒及其使用方法。本发明所述检测SARS‑CoV‑2病毒的引物探针组合特异性好，灵敏度高，检测结果准确；所述基于微流控数字PCR的SARS‑CoV‑2病毒联合检测试剂盒检测耗时短，成本较低；操作简便，可用于定性检测和定量检测，应用价值极高。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，尤其涉及一种检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合及其应用。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)传染性强，潜伏期长，危害人们的身体健康，阻止社会的发展，造成了巨大的损失。目前，SARS-CoV-2病毒检测的方法主要有四种：测序法、qPCR法、胶体金法和磁微粒化学发光法。

测序可以检测微量物质，适用的体液类型较多。但测序检测需要配合使用测序的仪器，给临床的检测带来了困难，此外，对于测序结果进行分析也需要工作人员具备一定的生信基础，对操作人员的水平要求较高。qPCR法是目前应用最广的检测方法，但受采样部位、采样量、运输、储存及实验室检测条件和人员操作因素的影响，可能存在一定的误差，准确度有待进一步提高。胶体金法和磁微粒化学发光法都属于抗体检测，对病人IgM/IgG特异性抗体进行血清学检测，具有较高特异性。但由于检测的目标是患者血清中的抗体，而患者从感染病毒到体内生成抗体需要较长的时间，所以该方法通常只能检测出感染病毒时间较长的患者。SARS-CoV-2病毒携带者存在一定时间的潜伏期，对于潜伏期的患者，抗体法检测的效果不佳，而潜伏期患者同样具有传染性，不利于疫情的控制。

目前市面上也存在一些用于检测SARS-CoV-2病毒的相关试剂盒。CN211235890U公开了一种SARS-CoV-2检测试纸条、检测卡和检测试剂盒，包括依次相连的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫，结合垫上包被有胶体金标记的SARS-CoV-2抗原，反应垫包括检测区和质控区，检测区设置有包被抗人IgA抗体的第一检测线、包被抗人IgG抗体的第二检测线以及包被抗人IgM抗体的第三检测线。该产品操作简单，使用方便，准确率高，特异性强，但由于该试剂盒对抗体进行检测，同样存在只能检测出感染时间较长的患者的弊端。

关于SARS-CoV-2病毒的检测，目前普遍存在对感染初期的患者的检测灵敏度较低、准确性较差的问题。如何提供一种SARS-CoV-2病毒的检测方法，可以增加检测的灵敏度，能够对感染初期的病人进行及时的诊断与治疗，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合及其应用，所述检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合特异性强，灵敏度高，检出所需的模板量较少，几种引物探针组合配合使用，可以提高检测的准确率；所述基于微流控数字PCR的SARS-CoV-2病毒联合检测试剂盒使用简单，操作方便，应用价值极高。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合，所述检测SARS-CoV-2病毒的引物探针组合特异性扩增并检测SARS-CoV-2病毒的ORF1ab基因、N基因或E基因中的任意一种或至少两种的组合；

扩增所述ORF1ab基因的特异性引物对包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列，检测所述ORF1ab基因的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；

扩增所述N基因的特异性引物对包括SEQ ID No.4～5所示的核苷酸序列，检测所述N基因的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；