[发明专利]一种混合发酵产酶工艺

权利要求书

1.一种混合发酵产木聚糖酶和纤维素酶的方法，其包括如下步骤：

1）制备里氏木霉种子液：将里氏木霉接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基中进行种子培养，得到浓度为2×10⁸cfu/ml的里氏木霉种子液；

2）制备匍枝根霉种子液：将匍枝根霉接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到种子培养基上进行种子培养，获得浓度为5×10⁸cfu/ml的匍枝根霉种子液；所述种子培养基的组分为：葡萄糖1.5%，硫酸铵0.4%，磷酸二氢钾0.6%，玉米浆2%，余量为水，以上为重量百分比；

3）制备短小芽孢杆菌种子液：将短小芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到LB液体培养基上进行种子培养，获得浓度为5×10⁸cfu/ml的短小芽孢杆菌种子液；

4）制备产酶培养基：将玉米秸秆粉碎，过50目筛，然后与豆粕按照1:1的质量比混合，再添加到3倍重量的水中，然后500rpm搅拌5min，再升温至60℃，保温条件下，超声处理30min，超声频率为28kHz，然后添加硫酸二氢钾0.5g/L、七水硫酸镁0.1g/L、七水硫酸亚铁0.1g/L，121℃蒸汽处理10min，自然冷却至室温，得到产酶培养基；

5）混合发酵产酶：往发酵罐中装60%体积的产酶培养基，将里氏木霉种子液按照8%的接种量接种到发酵罐中，控制通气比为 1:1.5，搅拌转速为 100rpm，培养温度为 30℃，培养12h，然后接种匍枝根霉种子液和短小芽孢杆菌种子液，接种量均为8%，通气比1:1.8，搅拌转速200rpm，培养温度32℃，继续培养12h，然后添加玉米秸秆粉30g/L，继续培养60h，得到发酵液；整个培养过程中，通过流加氨水控制pH为8；所述玉米秸秆粉的制备方法包括如下步骤：将玉米秸秆粉碎，过50目筛，即得；

所述里氏木霉为ATCC66589，所述匍枝根霉为ATCC60748，所述短小芽孢杆菌为ATCC700814。