[发明专利]一种用于维持脂肪间充质干细胞功能的改良增殖培养基

说明书

本发明提供一种用于培养肉种子细胞体外扩大培养的改良培养基，即脂肪间充质干细胞的体外扩大培养的改良培养基。改良后的培养基为添加bFGF的生长培养基，采用此改良培养基培养15天获得的细胞总数是对照生长培养基中获得的细胞总数的6倍，并且更为重要的是，脂肪间充质干细胞在体外大量扩增，达到需要的细胞数量之后，仍能保持较高的分化能力。因此，改良培养基有助于在体外获得大量具有功能性的脂肪间充质干细胞，较好地满足培养肉生产对种子细胞的数量和干细胞功能的需求。

技术领域

本发明属于干细胞和动物细胞培养肉技术领域，具体地，涉及一种用于维持脂肪间充质干细胞功能的改良培养基。

背景技术

培养肉是利用畜禽干细胞经过体外培养而获得的肉类，它不需要经过动物养殖，直接用细胞工厂化生产肉类。据报道，作为传统畜牧业的替代模式，可减少现有畜牧生产系统对环境和动物福利造成的负面影响。目前，关于细胞培养肉的大多研究都集中在肌肉细胞及其组织，虽然脂肪只占肉类的一小部分，但它是影响肉类风味、质地、营养和外观的关键因素。因此，在细胞培养肉制品中生产和掺入脂肪至关重要。

培养肉是需要在体外大量培养具有分化能力的种子细胞。脂肪间充质干细胞是目前培养肉种子细胞选择中最具有潜力的细胞之一，在一定的诱导条件下，可向成熟脂肪细胞分化。但是研究表明，脂肪间充质干细胞在体外长期扩增过程中容易失去原始干性，表现出增殖分化潜能降低和细胞衰老。

目前公认的体外培养脂肪间充质干细胞的培养基是含10％胎牛血清的DMEM/F12基础培养基。畜禽脂肪间充质干细胞在体外扩大培养过程中存在着增殖能力不断衰退，传代后期的细胞细胞分化效率降低甚至完全丧失分化能力。由于培养肉需要大量的种子细胞，但是目前的培养基体系无法满足细胞培养肉对种子细胞的数量和功能要求，因此如何建立一种可以维持猪脂肪间充质干细胞功能的培养条件至关重要。

发明内容

本发明的目的是延缓脂肪间充质干细胞在体外扩大培养过程中增殖和分化能力降低的现象，提供一种可以在体外维持猪脂肪间充质干细胞功能的培养基。

本发明的第一个目的是提供一种用于脂肪间充质干细胞体外扩大培养的增殖培养基，所述增殖培养基为向脂肪间充质干细胞生长培养基中添加生长因子后制备得到，所述脂肪间充质干细胞生长培养基包括基础细胞培养基和胎牛血清。

进一步的，所述生长因子为bFGF。

本发明所述bFGF是指碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growthfactor,bFGF)。

进一步的，基础细胞培养基为DMEM培养基、MEM培养基、DMEM/F12培养基、F10培养基中的一种

进一步的，所述脂肪间充质干细胞生长培养基中，基础细胞培养基和胎牛血清的体积比为9:1。

进一步的，所述bFGF在脂肪间充质干细胞生长培养基中的浓度为1-10ng/mL。

进一步的，所述bFGF在脂肪间充质干细胞生长培养基中的浓度为5ng/mL。

本发明的第二个目的是提供bFGF在促进脂肪间充质干细胞体外培养过程中的增殖速度，和/或维持脂肪间充质干细胞体外培养过程中的分化潜能中的应用，具体的，所述应用为将bFGF添加到脂肪间充质干细胞生长培养基中，获得前述的增殖培养基，利用所述增殖培养基对脂肪间充质干细胞进行体外扩大培养。

本发明的第三个目的是提供前述的增殖培养基在促进脂肪间充质干细胞体外培养过程中的增殖速度，和/或维持脂肪间充质干细胞体外培养过程中的分化潜能。

本发明所述的脂肪间充质干细胞包括但不限于猪脂肪间充质干细胞，牛脂肪间充质干细胞、羊脂肪间充质干细胞、鼠脂肪间充质干细胞。