[发明专利]一种抑制bcl-2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抑制bcl‑2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒，属于生物技术领域。一种抑制bcl‑2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒是由膜材料包裹一段反义寡聚核酸制成，所述的核酸序列为5’‑TCT CCC AGC GTG CGC CAT‑3’，或5’UCU CCC AGC GTG CGC CAU 3’。并公开了其制备方法。本发明中的纳米微粒，对肿瘤细胞的生长以及特定的靶基因有很好的阻断效果，特别是针对KB宫颈癌细胞具有很好的阻断效果。

本申请是申请号CN201610903392.1，申请日：2016年10月17日，发明名称为：“一种抑制bcl-2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒及其制备方法”专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抑制bcl-2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒及其制备方法。

背景技术

反义寡聚核酸一般由18-22核苷酸组成，通过碱基互补配对的原则选择性与靶信使RNA 结合，从而阻断或抑制特定的信使RNA的功能，并调控后续的靶基因的蛋白的表达。

Bcl-2是一种抑制细胞凋亡的基因，此种基因可以促进细胞的分裂，扩增，分化并在大多数肿瘤细胞中都有较高的表达，所以肿瘤可通过上调此基因而达到无限制的生长和扩散的目的。G3139是一段由18个核苷酸组成的反义寡聚核酸，核酸序列为5’-TCT CCC AGCGTG CGC CAT-3’，可通过碱基互补配对的原则和编码bcl-2的信使RNA结合，从而较好的抑制 bcl-2基因以及下游的蛋白的表达。然而，根据之前文献报道，大多数反义寡聚核酸缺乏适合的递药系统，借助本身的功能很难进入细胞内而发挥作用，它们也与靶信使RNA 有较弱的结合作用，很难长时间保持抑制结合作用，并且大多数反义寡聚核酸在血浆中的核酸酶的作用下易降解而失去治疗作用。G3139虽然经历多年的临床试验有一定的疗效，最终因为疗效不能打到美国FDA的标准而未能获得批准。

现有技术中的脂质纳米粒膜材料并没有将吐温(Tween)化合物和聚乙二醇(PEG)衍生物例如TPGS结合的情形，如果单独使用Tween：Tween具有较短的PEG链，这样短链的PEG可以增加纳米粒之间的排斥性，以防止其聚集而降低稳定性。另一方面，由于缺少了长链PEG 嵌合在纳米粒表面，这种纳米制剂容易被吞噬细胞吞噬而失去作用，因为吐温很容易在全身循环中丢失。

再例如单独使用聚乙二醇(PEG)衍生物例如TPGS：虽然TPGS有着较长的PEG链，可以在一定程度上躲避吞噬系统的识别，不被吞噬细胞吞噬而失去作用，增加长循环时间，然而如果有很多的TPGS，纳米粒会很难有效的被靶肿瘤细胞摄取，因为存在空间位阻效应。

对于G3139这种反义寡聚核酸来说，之前的修饰大多数为硫代磷酸(PS)化的，这种修饰虽然在一定程度上可以提高反义寡聚核酸的稳定性，但是其与信使RNA的结合能力、强度以及匹配度都大大的减弱了。

发明内容

1.发明要解决的技术问题

本发明的目的在于克服上述技术不足，提供了一种提高纳米微粒本身稳定性，从而促进药物在肿瘤组织的释放并且减小被降解的可能性，同时提高反义寡聚核酸对核酸酶的抵抗性、提高与信使RNA的匹配准确性与结合能力的药物。

2.技术方案

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种抑制bcl-2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒，是由膜材料包裹一段反义寡聚核酸制成的脂质纳米粒，所述的核酸序列为5’-TCT CCC AGC GTG CGC CAT-3’，又名G3139；或5’UCU CCC AGC GTG CGC CAU 3’。

进一步的技术方案，所述的膜材料包括阳离子类脂、中性磷脂、胆固醇、吐温、聚乙二醇衍生物，其摩尔比为(25-35):(40-50):(15-25)：(1-5):(1-5)。