[发明专利]一种微小RNA、抑制剂和在自然杀伤细胞体外培养中的应用

说明书

本发明公开了一种微小RNA、抑制剂和在自然杀伤细胞体外培养中的应用。本发明发现，高良姜素‑3‑甲醚可以提高NK细胞的杀伤活性，可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，这可能与高良姜素‑3‑甲醚体外可以促进NK细胞分泌细胞毒颗粒有关，而miRNA‑191可能是高良姜素‑3‑甲醚发挥上述作用的一个靶标。

技术领域

本发明属于免疫细胞领域，涉及免疫细胞培养，具体涉及一种微小RNA、抑制剂和在自然杀伤细胞体外培养中的应用。

背景技术

NK细胞为固有免疫系统的重要组成部分，其与T、B细胞不同，T、B细胞的激活依赖于抗原致敏、抗体或主要组织相容性复合体的参与，而NK细胞不需要以上步骤的参与便能够直接杀伤靶细胞，因此，NK细胞对比于其他免疫细胞，可以更加快速有效地清除病变细胞，其免疫监视作用更为直接有效。

NK细胞的上述功能使得其在肿瘤免疫细胞治疗领域得到广泛重视，也有越来越多的研究旨在使得NK细胞的上述功能进一步增强。

MiRNA-191是一种微小RNA，研究发现其过表达对NK细胞的肿瘤杀伤活性有明显的抑制作用(MiR-191过表达抑制NK细胞的肿瘤杀伤活性和细胞凋亡，免疫学杂志，2020年)。据此推测，miR-191可能参与调节了NK细胞的肿瘤杀伤活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微小RNA、抑制剂和在自然杀伤细胞体外培养中的应用。

本发明技术方案如下：

一种微小RNA及其抑制剂用于NK细胞体外培养提高其杀伤活性的用途，所述微小RNA为miRNA-191。

进一步地，所述抑制剂为高良姜素-3-甲醚。

有益效果：

本发明发现，高良姜素-3-甲醚可以提高NK细胞的杀伤活性，可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，这可能与高良姜素-3-甲醚体外可以促进NK细胞分泌细胞毒颗粒有关，而miRNA-191可能是高良姜素-3-甲醚发挥上述作用的一个靶标。

附图说明

图1中A为各组NK细胞的细胞毒颗粒的分泌水平；B为各组NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性；C为各组NK细胞中miRNA-191的表达水平。

具体实施方式

下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

人NK细胞购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司，按照说明书提供的方法复苏、传代，取生长状态良好的人NK细胞用于实验。

NK细胞培养液为德国CellGro SCGM，RPMI 1640培养液和胎牛血清购GIBCO；高良姜素-3-甲醚(CAS：6665-74-3)购自成都普瑞法科技开发有限公司，纯度95％～99％。

引物由广州锐博生物科技公司合成。

二、实验方法

1、NK细胞分泌细胞毒颗粒水平检测

取生长状态良好的人NK细胞，用NK细胞培养液重悬制成细胞浓度为4×10⁵/mL的细胞悬液，然后接种于12孔板中，每孔1mL，置于37℃、5％CO₂、饱和湿度的培养箱中培养过夜(12h)。次日，各孔分别加入1mL含有不同浓度高良姜素-3-甲醚的NK细胞培养基，使得高良姜素-3-甲醚的终浓度分别为0μM(对照组)、2μM(低浓度组)、5μM(高浓度组)，每个浓度3个复孔。于37℃、5％CO₂、饱和湿度的培养箱中继续培养48h，收集细胞，PBS洗涤、重悬，各取等量细胞分别加入PE-CD107a、穿孔素、颗粒酶B，采用流式细胞术检测PE-CD107a、穿孔素、颗粒酶B的表达水平。