[发明专利]一种多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验方法

说明书

本发明公开了一种多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验方法，包括如下步骤：准备材料；没食子酸标准曲线绘制；总酚的测定；SDS‑PAGE电泳；纳米粒度和Zeta电位仪分析。在研究的各种果汁中，POM果汁显示出与杏仁蛋白形成复合物有更大的能力。纳米粒度和Zeta电位仪测定表明杏仁蛋白提取物粒径急剧增加至约3800nm，并且用POM汁处理后通过电泳分析到杏仁蛋白较少。这些观察结果支持多酚和杏仁蛋白之间形成复合物，这些复合物就可以通过过敏原沉淀防止杏仁过敏原对抗体的识别。

技术领域

本发明涉及一种测定实验方法，特别涉及一种多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验方法。

背景技术

食品过敏对人们的生活质量产生了负面影响，有的甚至会危及生命。极少量的杏仁也会导致严重的反应，并且它们被包含在最常引起过敏的一组食物中。有研究表明多酚和富含多酚的果汁能与花生过敏原结合。酚酸类化合物和膳食多酚能有效的减弱花生过敏原与IgE结合和嗜碱性粒细胞脱粒。

各种水果，蔬菜和饮料都富含丰富的多酚，并且它们为人们提供多种健康益处。多酚可降低氧化应激，并可预防癌症或心血管疾病。另外，多酚可通过疏水性和氢相互作用与蛋白质形成可溶性或不溶性复合物。Soares等人报道多酚与不同的蛋白质相关联包括牛血清白蛋白和人α-淀粉酶。多酚化合物的大小和结构显著改变其结合的亲和力，随着分子量增加或在没食子酰基团存在下亲和力增加。茶多酚与乳α-和β-酪蛋白形成复合物，并且结构分析显示出疏水性和亲水性相互作用。这个想法进一步延伸到食物过敏原，多酚与食物过敏原相互作用，从而降低过敏食物的过敏性。例如，Chung和Champagne报道，向花生提取物和液体花生酱中加入酚酸降低了IgE的结合。同样，单宁酸通过形成多酚蛋白复合物去除花生过敏原。Plundrich等人，研究了各种富含多酚的植物汁液和提取物对花生粉过敏原的影响，结果表明蔓越莓汁处理的花生粉样品在小鼠模型中降低了过敏反应。但是目前还没有相关文献记载多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验方法，在研究的各种果汁中，POM果汁显示出与杏仁蛋白形成复合物有更大的能力。纳米粒度和Zeta电位仪测定表明杏仁蛋白提取物粒径急剧增加至约3800nm，并且用POM汁处理后通过电泳分析到杏仁蛋白较少。这些观察结果支持多酚和杏仁蛋白之间形成复合物，这些复合物就可以通过过敏原沉淀防止杏仁过敏原对抗体的识别，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种多酚类物质脱除杏仁过敏原测定实验方法，包括如下步骤：

步骤1：准备材料：Folin-Ciocalteu试剂、没食子酸标准品、考马斯亮蓝染液、蛋白预染Marker、β-巯基乙醇、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、三羟甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸钠SDS、甘氨酸、POM汁、BB汁、CG汁；

步骤2：没食子酸标准曲线绘制

准确移取没食子酸标准溶液(1000mg/L)2.5、5.0、10.0、15.0、20.0至50.0mL容量瓶中，分别配制成质量浓度为50、100、200、300、400mg/L的溶液，然后加入5.0mL质量浓度为40％的Folin-Ciocalteu试剂，反应8min后分别加入4.0mL7.5％Na₂CO₃溶液，再用去离子水定容至10ml，分别于30℃下反应1.0h，测定提取液在760nm处的吸光值；

步骤3：总酚的测定

使用Folin-Ciocalteu比色法测定POM汁、BB汁和CG汁的总酚量，并表示为每升毫克没食子酸当量，为制备样品，将稀释的500μLPOM汁、BB汁、CG汁和2.5mL稀释的Folin-Ciocalteu试剂在室温下混合8min，随后加入1.5mL的7.5％Na₂CO₃，在暗处培育2小时后，使用紫外可见分光光度计测量样品在760nm处的吸光度；