[发明专利]一种地顶孢霉培养物的制备方法

权利要求书

1.一种地顶孢霉培养物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将地顶孢霉菌种接种于固态培养基上，于15-28℃培养4-6天，待菌丝长满平板并产孢即可，得到一级菌种，固体培养基的组成为蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄0.2％，MgSO₄ 0.03％，CaCO₃ 0.05％，ZnSO₄ 0.01％，乙酸钠0.15％，琼脂粉2％，其余为水；固体培养基的pH值为6.5；

S2.将步骤S1所得一级菌种接种于摇瓶中的种子培养基，15-28℃、100-200转/分培养3-5天得到二级种子液，种子培养基的装液量为摇瓶体积的10-30％，种子培养基的组成为蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.03％，CaCO₃ 0.05％，ZnSO₄0.01％，乙酸钠0.15％，其余为水；种子培养基的pH值为6.5；

S3.将步骤S2所得二级种子液以10-30％的接种量接种于发酵培养基中，15-28℃发酵5-7天得到三级种子液，发酵过程中pH值为7-8，搅拌转速为100-200转/分，溶氧浓度为20-40％，发酵培养基的组成为蔗糖2％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄0.03％，CaCO₃0.05％，ZnSO₄ 0.01％，乙酸钠0.15％，其余为水；发酵培养基的pH值为6.5；

S4.将步骤S3所得三级种子液以10-30％的接种量接种于发酵罐的液体发酵培养基中，15-28℃发酵2-3天得到发酵液，发酵过程中pH值为6-7，搅拌转速为100-150转/分，溶氧浓度为20-40％，流量为20-40cm³/h，发酵罐内压力为0.04-0.06MPa，液体发酵培养基的组成为蔗糖1-3％，大豆糖蜜0.5-1.5％，酵母粉1-2％，大豆蛋白胨1-2％，K₂HPO₄ 0.1-0.3％，MgSO₄0.02-0.04％，CaCO₃ 0.04-0.06％，ZnSO₄ 0.01％，其余为水；液体发酵培养基的pH值为6.5；

S5.将复合酶液接种于步骤S4所得发酵液中，25-70℃、pH值为3-7条件下酶解0.5-2小时得到酶解液，复合酶液由β-葡聚糖酶、酸性蛋白酶、pH值为5.5的蒸馏水按照1g:1g:10mL的比例混合而成，复合酶液与发酵液的体积比为1:200；

S6.将保护剂加入步骤S5所得酶解液中，混合均匀得到混合液，将混合液喷雾干燥得到地顶孢霉培养物，保护剂的重量份组成为葡萄糖40份，水溶性淀粉55份，木瓜籽提取物5份；保护剂与酶解液的重量比为1:20，喷雾干燥时的进风温度为120-130℃，进料流量为100-120kg/小时，出风温度为55-65℃，所述木瓜籽提取物的制备步骤为：

将木瓜籽烘干后粉碎得到木瓜籽粉，将木瓜籽粉加入石油醚中超声提取45分钟得到提取液一，将提取液一离心分离10分钟得到上清液一，将上清液一旋蒸浓缩得到木瓜籽粗提物；将木瓜籽粗提物加入无水乙醇中，80℃下水浴搅拌10分钟后静置分层，取上层醇相加入氢氧化钠后80℃下水浴搅拌1小时得到提取液二，将提取液二离心分离10分钟得到上清液二，将上清液二旋蒸浓缩得到木瓜籽提取物。

2.根据权利要求1所述的一种地顶孢霉培养物的制备方法，其特征在于：所述木瓜籽提取物的制备步骤中：木瓜籽粉与石油醚的比例为1:17g/mL，超声提取时的超声功率为200W；木瓜籽粗提物、无水乙醇、氢氧化钠的比例为50g:80mL:1g；提取液一、提取液二离心分离时的离心速度均为8000转/分。