[发明专利]一种能同时检测维生素B6、B9的修饰电极制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种能同时检测维生素B6、B9的修饰电极的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)制备修饰电极

1)基体电极的预处理：选取玻碳电极、金电极或者铜电极作为基体电极，对基体电极表面进行抛光清洁处理后，备用；

2)制备修饰电极：在步骤1)制备的基体电极的电镀修饰溶液，用红外灯烘干制得所述修饰电极；将处理好的电极作为工作电极，铂丝电极为辅助电极，银/氯化银电极为参比电极，于制备的修饰溶液中，采用电位阶跃法使维生素B6、B9传感器探头进行修饰；

仪器参数设置：初始电极电势为-0.6~0.4V，终止电极电势为0.8~2V，扫描速度为20~200mV/s，搅拌条件下循环扫描6~15圈，然后用去离子水清洗，氮气吹干备用；

其中，修饰溶液由硫酸、石墨烯、碳纳米管、维生素B12、醋酸、柠檬酸、金纳米粒子、硝酸银、硫酸钠、醋酸钠、氯化钾、氨基黑10B中的一种或几种组成，各组分的浓度范围是0.0002~3mol/L；

(2)通过修饰电极进行检测

维生素B6、B9释放剂配置为：所述维生素B6、B9释放剂由溶剂和惰性支持电解质组成；所述溶剂为氢氧化钠、氢氧化钾、柠檬酸、盐酸、醋酸、磷酸、硼酸中一种或几种的水溶液，所述溶剂的浓度为0.00005~0.1mol/L；所述惰性支持电解质由醋酸钠、氯化钾、氯化钠、柠檬酸钠、磷酸氢二钾、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中一种或几种；所述惰性支持电解质的浓度为0.001~5mol/L；取100~1000mL的上述单一溶剂或混合溶剂于容量瓶中，按比例称取上述单一或复合支持电解质，加入容量瓶中，盖上瓶塞，轻摇，待支持电解质溶解后，用相同溶剂添加至容量瓶刻度线，溶液中支持电解质的浓度在0.001~5mol/L；

用微量移液器定量移取血液样品10~20μL于5.0mL试管中，再定量加入0.1~2.0mL维生素B6、B9特异释放剂，盖上试管塞，轻轻摇匀，放置5分钟，待血样中结合的维生素B6、B9释放出来，变成游离态的小分子，便可上机测定；

利用卷积电流伏安法同时检测待测血液样品中维生素B6、B9在工作电极上产生的氧化还原电流；两种维生素分别在特定的峰电位处出峰，且峰型很好，便于测量每种维生素所对应的峰电流，两峰互不干扰；

通过分别比较系列不同浓度的维生素B6、B9标准样品的电流信号值，与相对应的维生素B6、B9标准液浓度制作标准曲线，根据待测样品在相同条件下产生的电流信号值，

分别通过线性方程计算出待测血样中维生素B6、B9的含量；

利用卷积电流法检测血样中维生素B6、B9含量时，仪器参数初始电极电势为-0.4~0.2V，终止电极电势为0.8~1.4V，扫描速度为30~200mV/s，工作模式为0.5次、1.5次或2.5次微分模式，噪声滤波为低通模式。

2.根据权利要求1所述的一种能同时检测维生素B6、B9的修饰电极的检测方法，其特征在于：所述基体电极的抛光清洁处理具体包括：先将基体电极在不同型号的金相砂纸上进行打磨，使基体电极表面光滑如镜面；然后再将打磨过的基体电极依次在粒径1.0μm，0.3μm以及0.05μm的氧化铝抛光粉上进行镜面抛光；最后将打磨光亮的基体电极分别置于乙醇、去离子水中各超声2分钟，以除去基体电极表面残留的有机物和吸附的氧化铝粉末，将基体电极用氮气吹干备用。

3.根据权利要求1所述的一种能同时检测维生素B6、B9的修饰电极的检测方法，其特征在于：步骤(2)中滴涂在基体电极表面的修饰溶液为5~800微升。