[发明专利]适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法

权利要求书

1.适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于包括如下步骤：

1)确定评价区域并挑选监测植物；

2)采集和固定监测植物的花；

3)分离与染色植物花粉粒，作为待测样品；

4)利用流式影像仪测定待测样品的花粉样品图谱数据；

5)构建样本植物的正常/败育花粉粒标准图谱库；

6)监测区域植物花粉败育快速批量检测；

7)确定植物花粉的自然败育率和效应败育率；

8)空气污染暴露的评估与计算。

2.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤1)中，所述确定评价区域是根据评价目的，将待评的城市群细分出n个不同类型的评价区，分别命名为B₁，B₂，…，B_n，选一个生态良好区域为背景区，命名为B₀；所述挑选监测植物可挑选至少一种典型、且待评的城市群各评价区共有的植物种类作为监测植物。

3.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤2)中，所述采集是在监测植物花期采集花蕾；所述固定是将采集的花蕾放入固定液浸渍24h备用；所述固定液为乙醇︰冰醋酸＝3︰1；所述乙醇浓度可采用无水乙醇，浓度≥99.7％。

4.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤3)中，所述分离与染色植物花粉粒的具体步骤为：取出固定的植物花蕾，剥取花药并分离出花粉，放入离心管中，加水振荡30～60s，加入0.1～0.3mL醋酸洋红，振荡30～60s，100μm滤膜过滤后移入具蒸馏水的离心管形成花粉粒悬浊液，作为待测样品；优选，加水振荡30s，加入0.15mL醋酸洋红，振荡30s，100μm滤膜过滤。

5.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤4)中，所述利用流式影像仪测定待测样品的花粉样品图谱数据的具体步骤为：启动流式影像仪，根据样品及仪器运行要求设置运行参数，取步骤3)中的待测样品充分混均后，取1～2mL溶液加入到流式影像仪的进样器中，测得样品的花粉图谱数据。

6.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤4)中，所述流式影像仪的主要参数设定如下：显微物镜放大倍数10X；获取物的基本尺寸：10～100μm；进样量：1～2mL；流速0.2～0.5mL/min，测定时间2～3min，启动自动图像模式；优选，进样量：1mL；流速0.3mL/min，测定时间2min。

7.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤5)中，所述构建样本植物的正常/败育花粉粒标准图谱库的具体方法为：利用步骤4)获得的数据，结合人工判读，区分正常和败育花粉图谱，根据流式影像仪提供的方法，构建具有过滤、分类及模板功能的标准图谱库，作为正常和败育花粉图谱自动分类和判别的标准参数。

8.如权利要求1所述适用于城市群空气污染暴露评估的花粉败育快速批检测法，其特征在于在步骤6)中，所述监测区域是在评价区域内选择至少2个区域作为监测区域；所述监测区域植物花粉败育快速批量检测的具体方法可为：依据步骤1)制定监测采样计划，按计划批量采样，并依次重复步骤2)和3)获得样品的图像数据，再利用流式影像仪自带的VisualSpread程序，对所得图像数据进行分类识别计数，得到每一样品败育花粉粒数N1和正常花粉粒数N2，并计算样品的花粉败育率R＝N1*100/(N1+N2)；

所述对所得图像数据进行分类识别计数，考虑到花粉败育程度和形状的多样性，在Visualspread程序基于标准图像库进行自动分类时，结合手动识别进行训练，以提高分类的准确率。