[发明专利]一种利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒及其应用，属于分子生物领域。本发明为了解决免疫印迹反应操作困难、试剂查找和对比耗费大量时间的问题。本发明提供的利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒，所述试剂盒包括：RIPA裂解液、PMSF、BCA蛋白浓度测定试剂、ECL发光检测液、预染蛋白Marker、Goat Anti‑Rabbit IgG‑HRP、10g脱脂奶粉、10×PBS缓冲液、5×SDS‑PAGE上样缓冲液、电泳缓冲液、转膜缓冲液、10×TBST缓冲液和PVDF膜。免疫印迹实验的试剂盒检测灵敏度高，可经过多次验证，实验结果客观准确。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒及其应用。

背景技术

Western是目前实验室用抗体检测蛋白的最常用方法。但目前存在Western(免疫印迹)整体实验操作困难的问题。究其原因是所需试剂耗材均需要单独购买，试剂查找、对比耗费大量时间；所需试剂均需单独配制、调整比例、验证可用性；很多试剂一次用不完，造成浪费；优化实验条件时，认为差异性大，极易造成结果不准确。

发明内容

本发明的目的是为了解决免疫印迹反应操作困难、试剂查找和对比耗费大量时间的问题，本发明提供了一种利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒，所述试剂盒包括：5mL RIPA裂解液、50μL PMSF、BCA蛋白浓度测定试剂、10mL ECL发光检测液、20uL预染蛋白Marker、15μL Goat Anti-Rabbit IgG-HRP、10g脱脂奶粉、80mL 10×PBS缓冲液、2mL 5×SDS-PAGE上样缓冲液、200mL电泳缓冲液、150mL转膜缓冲液、200mL 10×TBST缓冲液和3片PVDF膜。

进一步地限定，所述RIPA裂解液由以下成分组成：体积分数1％的Triton X-100、质量1％deoxycholate和质量分数0.1％的SDS。

进一步地限定，所述PMSF浓度为100mM。

进一步地限定，所述10×PBS缓冲液的制备方法为每一升溶液中含有2.4g KH₂PO₄、14.4g Na₂HPO₄、80g NaCl和2g KCl。

进一步地限定，所述5×SDS上样缓冲液由以下成分组成：质量分数4％的SDS、体积分数10％的β-巯基乙醇、体积分数为20％的甘油、质量分数为0.004％的溴酚蓝和0.125MTris-HCl，pH＝6.8。

进一步地限定，所述电泳缓冲液由以下成分组成：25mM Tris、190mM甘氨酸和0.1％SDS，pH＝8.3；所述转膜缓冲液由以下成分组成：25mM Tris、190mM甘氨酸和体积分数为20％的甲醇。

进一步地限定，所述PVDF膜的规格为8.5cm×6cm，PVDF膜孔径是0.45μm。

本发明还提供了上述利用抗体做免疫印迹实验的试剂盒在检测HSP70中的应用。

有益效果：免疫印迹试剂盒包含了从蛋白裂解提取到ECL底物曝光在内的所有试剂；各种试剂均已配制好，不需要单独调整配比；试剂盒内含有详细流程及实验条件，无需反复摸索；检测灵敏度高，可经过多次验证，实验结果客观准确；一个试剂盒可完成3块凝胶(约30个样)对应的Western Blot实验需求。

附图说明

图1为免疫印迹实验的结果图。

具体实施例

实施例1.