[发明专利]一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法

说明书

本发明公开了一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，属于植物组织培养技术领域。所述方法包括：(1)取吊瓜组织培养苗茎段，接种于丛生芽诱导培养基中培养形成丛生芽，所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加有6‑苄氨基腺嘌呤和抗生素；(2)取丛生芽茎段，接种于生根培养基中培养至芽生根，获得生根苗，所述生根培养基以1/2 MS为基本培养基，添加有α‑萘乙酸和抗生素；所述抗生素为利福平或氨苄青霉素,浓度为5～20mg/L。本发明通过在培养基中添加利福平或氨苄青霉素，并优化培养基配方，有效抑制离体培养吊瓜苗内生菌的增生，解决吊瓜组织培养过程中内生菌污染问题，解决吊瓜优质种苗的供应问题。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法。

背景技术

吊瓜，又名栝楼，是葫芦科多年生草质藤木植物，生长在海拔100～1800米气候温润的山谷密林和坡地灌丛中。它是一种名贵的中药材，据《本草纲目》、《中药大辞典》、《中国医学大全》等中医药文献记载：皮、籽、根均可入药，具有润肺化痰、降火止咳、宽胸散结、消肿祛毒、润肠通便功效。据《本草纲目》载，吊瓜(栝楼)籽炒用，补虚劳口干、润心肺、治手面皱，现代研究和权威机构检测吊瓜籽含不饱和脂肪酸、蛋白质等。

由于吊瓜生命力强，易学易种，管理方便，且当年投入，当年收获，数年收益，备受种植户青睐，曾一度成为农业新兴产业中的支柱产业。由于吊瓜种植均采用粗放管理模式，所以吊瓜植株容易出现内生菌。即引种3-5年后，吊瓜产量逐年降低，病虫害越来越严重，乃至全地块，全区域绝产。

植物内生细菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的细菌，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离，被感染的寄主(至少是暂时)不表现出来外在病症，在植物组织培养中这些内生细菌就会生长出来，并引起组织培养苗的污染，造成严重损失。现有技术中常规的组培方式仅能杀灭表面病菌，内生菌往往在培养后造成培养物的再次污染。因此，植物组织培养中，内生菌的抑制尤为重要。

专利文献CN106106168A公开了一种去除植物组织培养时外植体内生菌的方法，包括：采用多菌灵对扦插土壤进行消毒处理，采用含有两性霉素B和硫酸链霉素的无菌水溶液对扦插枝条进行消毒处理，以及对半木质化的新发枝条进行预处理，从而能够有效清除杨树等外植体表面及内部的细菌及真菌。

目前，在吊瓜组织培养过程中如何有效解决内生菌污染问题，尚未有研究报道，亟待开发一种针对吊瓜组培苗抑制其内生菌增生的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，可以减少吊瓜组织培养苗内生菌的污染，降低生产成本，实现吊瓜育苗的工厂化批量生产，可有效解决吊瓜优质种苗的供应问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，包括以下步骤：

(1)取吊瓜组织培养苗茎段，接种于丛生芽诱导培养基中培养形成丛生芽，所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加有6-苄氨基腺嘌呤和抗生素；

(2)取步骤(1)培养得到的丛生芽茎段，接种于生根培养基中培养至芽生根，获得生根苗，所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加有α-萘乙酸和抗生素；

所述抗生素为利福平或氨苄青霉素,浓度为5～20mg/L。

具体地，吊瓜为“越蒌3号”。

研究表明，通过在组织培养基中添加利福平(rif)、氨苄青霉素(amp)，可有效抑制内生菌的增生，从而使吊瓜组培苗能正常生长，建立吊瓜快速繁殖体系。

进一步地，所述丛生芽诱导培养基和生根培养基中均添加有浓度为10～15mg/L的利福平或氨苄青霉素。在上述浓度条件下，不仅有效抑制吊瓜组培苗内生菌的增殖，而且对组培苗的生长影响较小。