[发明专利]基因GliT作为筛选标记基因在抗性筛选中的应用

说明书

本发明公开了基因GliT作为筛选标记基因在抗性筛选中的应用。GliT基因其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。鉴于目前尚未有关于深海真菌基因作为分子筛选标记的相关报道。因此本发明从深海真菌FS140的cDNA文库中获得了筛选标记GliT基因序列，并成功导入到酿酒酵母S.cerevisiae BJ5464中通过抗生素药物筛选进行功能验证，从结果推测GliT基因将抗生素药物转化成不具有生物活性的氧化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，GliT是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染抗生素抗性基因的真核细胞，利于后续解析GliT基因与抗生素作用机制奠定分子生物学基础，同时可开发成一种高效表达且高抗的筛选标记基因应用于分子生物学、微生物学和医药等领域。

技术领域

本发明涉及一种筛选标记基因，具体涉及基因GliT作为筛选标记基因在抗性筛选中的应用。

背景技术

筛选标记基因可使转化子获得自身所不具备的新的遗传特性；是遗传转化载体所必备的基本元件；是利用特定的选择培养基筛选转化子的一类特殊标记基因。抗性筛选是将抗性基因转入受体菌中使其在一定药物浓度下生长而表现抗药性的一类筛选方式。常用的抗性筛选标记基因分为抗生素抗性基因和除草剂抗性基因两类。抗生素类药物对细胞生长的抑制作用主要在于影响细胞壁的形成和细胞膜的功能、抑制核酸或蛋白质的生物合成。常用的抗生素包括潮霉素、遗传霉素、寡霉素、博来霉素及苯菌灵。

随着基因组时代的发展，主要丝状真菌基因组测序基本完成而被广泛应用于工业、农业、医药等领域。然而丝状真菌的遗传转化效率极低，为了保证在大量非转化子背景下能筛选到目标转化子，恰当的筛选标记显得尤为重要。在使用潮霉素抗性基因为分子标记的真菌遗传转化实验中，常会出现较多的假阳性和遗传性能不稳定的转化子，需要大量的筛选工作，降低了工作效率。因此探索找到一个能在真核系统中高效表达且高抗基因对于进一步提高阳性转化子的筛选效率意义重大。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供基因GliT作为筛选标记基因在抗性筛选中的应用。

本发明根据深海真菌Geosmithia pallid FS140基因组测序结果显示，GliT基因编码的氧化还原酶，通过在酿酒酵母S.cerevisiae BJ5464中抗生素药物筛选的功能验证，从结果推测其可将抗生素转化成不具有生物活性的氧化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，GliT是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染抗生素抗性基因的真核细胞，可开发成一种高效表达且高抗的筛选标记基因应用于分子生物学、微生物学和医药等领域。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明的第一个目的是提供基因GliT作为筛选标记基因在抗性筛选中的应用，所述的基因GliT，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的抗性基因GliT通过以下方法获得的：通过转录组测序结果预测编码筛选标记基因GliT的序列，在其上下游设计特异性引物，其引物序列为GliT-F:5'-ATGTCCATCGGAAAACTTCTCGC-3'；GliT-R:5'-CTATGGCTCCCAATCAATCCCAAAT-3'，以由深海真菌FS140转录组反转录而得的cDNA文库为模板，通过PCR扩增获得产物并纯化回收片段，获得抗性基因基因GliT，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。