[发明专利]一种银杏叶提取物产品中5种银杏酸的超痕量检测方法

说明书

本发明公开了一种银杏叶提取物产品中5种银杏酸的超痕量检测方法，属于检测技术领域。该方法是将待测样品经超声提取后采用液相色谱串联质谱进行检测，通过对提取溶剂和提取次数的考察，以及超声时间的确定，建立了一种前处理简单易操作、提取效率高，定性、定量结果准确的高灵敏检测方法，可以满足银杏叶提取物产品中银杏酸含量的精准检测，能够全面监测银杏叶提取物产品中银杏酸含量，对保障银杏叶提取物产品的安全性具有重要的作用。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种银杏叶提取物产品中5种银杏酸的超痕量检测方法。

背景技术

银杏叶提取物为银杏科植物银杏的叶子经干燥后加工制成的提取物，具有活血化瘀、通经疏络的功效，通常可以制成保健品、药品等，多用于改善微血管循环、治疗缺血性心脑血管疾病等。银杏酸是存在于银杏的叶、种子、根和树皮中的2-羟基-6烷基-苯甲酸酯类化合物，是银杏提取物中的最主要毒性物质，常见的银杏酸有5种，分别为白果新酸(C13:0)、白果酸(C15:1)、氢化白果酸(C15:0)、十七烷一烯银杏酸(C17:1)和十七烷二烯银杏酸(C17:2)。银杏酸具有致敏、致突变和较强的细胞毒性，可以引起过敏反应、基因突变、神经损伤，从而导致恶心、胃灼热、过敏性休克、过敏性紫癜、抽搐、瘫痪等不良反应。目前世界各国都将银杏酸作为银杏类产品质量控制的关键指标。

测定银杏叶中银杏酸的方法有很多，TLC法快速、廉价、操作简便，但由于误差大、精密度有限，仅适用于定性分析；GC和GC-MS测定银杏酸需要衍生化，比较繁琐，而且不容易判断结果，因为测定的是银杏酸衍生物，而不是银杏酸本身。液相色谱-质谱联用技术具有效率高、速度快、灵敏度高等优点，适用于测定痕量、分离困难或变化多端的组分，同时给出了样品的保留时间、分子量和特征组分结构碎片等丰富的信息。

现有的银杏酸类物质检测中，有的只定量一个白果新酸，然后根据经验系数换算成总银杏酸的含量，但是仅仅通过测定1个或者2个银杏酸，很难准确的判定产品中总银杏酸的含量，对于评估银杏类产品的安全性问题具有一定风险性。因此，建立5种银杏酸的检测方法，意义重大。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种银杏叶提取物产品中5种银杏酸的超痕量检测方法，该方法前处理简单、便捷、提取效率高，液相色谱串联质谱不仅可以较好的分离5种银杏酸，且检测结果稳定、可靠，灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种银杏叶提取物产品中5种银杏酸的超痕量检测方法，包括以下步骤：

步骤1，预处理：取待测样品粉碎、过筛，加入提取溶剂，超声提取，静置冷却，滤纸过滤分离，过滤后的残渣再用提取溶剂提取一次，合并两次滤液，定容瓶定容，过有机滤膜后即得到待检样品液；

步骤2，检测：将步骤1获得的待检样品液用液相色谱串联质谱检测，通过二级离子碎片的丰度比定性，外标法定量；

所述5种银杏酸为白果新酸、白果酸、氢化白果酸、十七烷一烯银杏酸和十七烷二烯银杏酸；

所述液相色谱条件如下：

色谱柱为C₁₈色谱柱(1.8μm，2.1×50mm)

流动相：流动相A为0.2％乙酸水溶液，流动相B为异丙醇和乙腈的混合物，异丙醇和乙腈的体积比为40：60

梯度程序：0～3.0min,60％～92％B；3.0～6.0min,92％B；6.0～8.0min,92％～95％B；后运行：2min

进样量：2μL；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；

所述质谱条件如下：

离子化模式：电喷雾双喷离子源，负离子模式(Dual AJS ESI^-)