[发明专利]阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体VH的CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:1‑3所示的氨基酸序列，VL的CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:5‑7所示的氨基酸序列。并公开了其制备方法。本发明通过噬菌体展示的方法筛选出一种全新的高效封闭异嗜性人IgM反应性的抗体。一方面得到的抗体序列可读，可以通过亲和力成熟的方法再次提高结合力和稳定性，另一方面利用CHO细胞高密度悬浮培养生产重组抗体产量高、成本低、批间差小、尤其是与以往的封闭剂都需要使用大量小鼠生产腹水进行生产相比具有明显的动物福利优势。并且为后期开发复合Fc亚型的主被动混合型的高效封闭异嗜性人IgM反应性的抗体提供了序列基础。

技术领域

本发明涉及一种阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体及其制备方法，属于医学免疫领域。

背景技术

异嗜性抗体(HA)是由已知的或未知的抗原物质刺激人体产生的一类具有足够滴度、能与多个物种的免疫球蛋白发生相对弱的结合的多重特异性的免疫球蛋白。异嗜性抗体的产生通常是由于人类直接接触到动物、污染的食品、未经高温消毒的鲜奶和免疫疗法或者接种来源于动物血清或组织的疫苗产品后产生。据研究证实，在健康人群中，约3％～15％体内含异嗜性抗体，这些异嗜性抗体经常引起测值的假阳性，严重干扰免疫检测试剂的结果。

常见的异嗜性抗体有人自身类风湿因子(RF)和人抗小鼠抗体(HAMA)等。

人自身类风湿因子(RF)可以与人自身的免疫球蛋白(IG)结合，同时也可以与动物免疫球蛋白交叉反应，从而引起RF干扰。RF因子分为IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型，其中70～80％为IgM型。

人抗小鼠抗体(HAMA)可以特异性的结合小鼠抗体。目前免疫诊断试剂中的单克隆抗体基本都是小鼠来源，所以HAMA引起的干扰非常普遍。HAMA抗体中IgM型是五聚体十价抗体，能够形成大量非特异性的捕获抗体-HAMA-标记抗体的免疫复合物，严重影响结果的准确性。因此如何有效阻断异嗜性人IgM反应性是各类免疫类抗原检测系统所必须解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体，该抗体可以有效阻断异嗜性抗体的干扰，可用于胶乳比浊等体外诊断方法，提高检测准确性。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体，其特征在于：VH的CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列，VL的CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:5-7所示的氨基酸序列。

优选的，所述VH具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述VL具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

本发明还提供了上述的阻断异嗜性人IgM反应性的单克隆抗体的制备方法，其步骤包括：

(1)表达人IgM CH1抗原：构建表达人IgM CH1抗原的质粒，转染到大肠杆菌菌株中，选择阳性克隆，大量表达后回收菌体，超声裂解后通过镍柱纯化出His tag-人IgM CH1抗原；

(2)免疫小鼠：取小鼠，先免疫His tag-人IgM CH1抗原，再免疫天然人IgM，取全血并取脾脏；

(3)构建抗人IgMCH1的噬菌体抗体展示库：提取小鼠脾脏RNA，并用IgG恒定区C末端部分的反向特异性引物合成抗体cDNA库，以小鼠抗体重链可变区N末端正向引物和重链可变区C末端反向引物PCR扩增小鼠抗体VH部分基因、以小鼠抗体轻链可变区N末端正向引物和可变区C末端反向引物PCR扩增小鼠抗体VL部分基因、并通过预先设计的引物接头部分序列将VH和VL重叠延伸扩增出VH-linker-VL基因，以SfiI和NotI酶切VH-linker-VL片段并纯化，将该片段连接到预先准备好的噬菌体展示载体；