[发明专利]一种苯磷硫胺的检测方法

说明书

本发明公开了一种苯磷硫胺的检测方法，该检测方法包含以下步骤：(1)配制对照品和供试品溶液；(2)检测：采用高效液相色谱法，流动相A为0.01％～1％的酸性缓冲液，流动相B为有机溶剂，洗脱梯度流动相A以体积比计，0分钟：15％→15％，0～12分钟：15％→15％，12～35分钟：15％→37％，35～50分钟：37％→37％，50～60分钟：37％→15％；(3)计算步骤(2)的检测图谱中苯磷硫胺的纯度。该检测方法建立了特有的苯磷硫胺的检测方法，可以准确检测苯磷硫胺的纯度，专属性、灵敏度、准确度及重复性均良好。

技术领域

本发明涉及一种苯磷硫胺的检测方法，尤其涉及一种可以准确检测苯磷硫胺纯度的检测方法。

背景技术

苯磷硫胺的化学名称为：S-{(Z)-2-[(4-氨基-2-甲基嘧啶-5-基)甲基-甲酰基氨基]-5-膦酰氧基戊-2-烯-3-基}苯甲酸硫代酯；分子式为：C₁₉H₂₃N₄O₆PS；分子量为：466.45；结构式如下所示：

由于苯磷硫胺具有酸碱两性性质，且极性较大，目前对苯磷硫胺质量控制均使用离子对液相体系，在使用离子对试剂后，由于基线难以平衡且具有较多梯度峰，使样品的纯度与真实值相比不一致，存在峰型、基线、鬼峰，杂质无法在LC-MS上进行确证等问题，均不利于质量控制，严重影响苯磷硫胺的质量和服用安全。

发明内容

发明目的：本发明旨在提供一种专属性、灵敏度、准确度及重复性均良好的苯磷硫胺的检测方法。

技术方案：本发明的苯磷硫胺的检测方法，其特征在于，所述检测方法包含以下步骤：

(1)配制对照品和供试品溶液；

(2)检测：采用高效液相色谱法，流动相A为0.01％～1％的酸性缓冲液，流动相B为有机溶剂，洗脱梯度中流动相A以体积比计，0分钟：15％→15％，0～12分钟：15％→15％，12～35分钟：15％→37％，35～50分钟：37％→37％，50～60分钟：37％→15％；

(3)计算步骤(2)的检测图谱中苯磷硫胺的纯度。

本发明采用反反相模式的反相高效液相色谱法进行检测，检测器选用二极管阵列检测器(DAD)，可以有效分离供试品中10个相关物质色谱峰。

进一步地，步骤(1)中所述供试品溶液的浓度为1～2mg/ml。具体配制方法为：称取苯磷硫胺供试品用浓度为50％的乙腈-水溶解并稀释，得到浓度为1～2mg/ml的供试品溶液。

进一步地，步骤(2)中所述流动相A为磷酸水溶液，所述流动相B为乙腈。其中，流动相A优选为0.5％磷酸水溶液。

进一步地，步骤(2)中检测使用酰胺基硅胶键合色谱柱。

进一步地，步骤(2)中检测柱温为20～50℃；更进一步地，检测柱温为30～50℃；其中，检测柱温优选为30℃、40℃或50℃，更优选为40℃。

进一步地，步骤(2)中检测进样量为5～100μl，流速为1～1.5ml/min。其中，进样量优选为20μl，流速优选为1.2ml/min。

进一步地，所述色谱柱柱长为100～250mm，色谱柱填料粒度为3.0～5.0μm，色谱柱直径为3.0～5.0mm。其中，色谱柱优选为Ascentis RP-Amide、Accucore 150-Amide-HILIC、Waters Xbridge amide中的一种，色谱柱直径优选为3.5mm，色谱柱长度优选为250mm，色谱柱填料粒度优选为3.5μm。

进一步地，步骤(3)中所述苯磷硫胺的纯度按照面积归一化法计算。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：