[发明专利]基于隐球酵母Y3胞内酶降解赭曲霉毒素A的用途

说明书

本发明属于生物防治技术领域，涉及一种基于隐球酵母Y3胞内酶降解赭曲霉毒素A的用途；步骤为：首先将隐球酵母Y3接入NYDB培养基中，培养活化后，取菌液涂布于NYDA培养基；然后，挑选单菌落接种到PM培养基中，培养后经离心得到菌体，无菌蒸馏水清洗后，稀释成1×10⁸cells/mL的菌悬液，接种于PM培养基中培养后，离心收集菌体，加入液氮、研磨，得到粉末状的菌体；再加入Tris‑HCl缓冲液重悬，震荡后经冰浴处理、离心，收集上清液，通过有机针孔滤膜过滤除菌，得到胞内酶溶液；在胞内酶溶液中加入赭曲霉毒素A，在避光环境下，震荡培养，即可实现降解赭曲霉毒素A的用途；本发明安全环保，可高效快速降解赭曲霉毒素A。

技术领域

本发明属于生物降解毒素的方法，具体涉及一种基于隐球酵母Y3胞内酶降解赭曲霉毒素A的用途。

背景技术

真菌毒素是由真菌类微生物产生的次级代谢产物，到目前为止，人们发现了至少300种真菌毒素。世界上毒性最强的五类真菌毒素中，赭曲霉毒素A排列第二，其最明显的毒性作用是肾毒性，其次还有肝脏、免疫毒性等，被国际癌症研究机构列为2B类人类致癌物。

除了严重的毒性作用，赭曲霉毒素A在食品和饲料中污染严重。自然界中产生赭曲霉毒素A的主要霉菌有两类，第一类是Aspergillus ochraceus和Penicilliumverrucosum，这两类真菌的寄主主要是农作物，包括玉米、小麦、水稻等，该类霉菌在热带和亚热带地区发病较为严重；还有一种霉菌是Aspergillus carbonarins，其寄主主要是葡萄，该类霉菌在寒冷的地区发病比较严重。到目前为止，赭曲霉毒素A已经被发现存在于各类食品中，如酱油，葡萄及其制品，以及肉类产品和咖啡中。赭曲霉毒素A在人体中的存在也是令人担忧的问题，2019年基于葡萄牙地区的研究发现，超过90％的儿童的尿液中被检测到该毒素。

由于赭曲霉毒素A极强的毒性和广泛的污染，在食品和饲料中控制其含量是保障食品安全的重要举措。赭曲霉毒素A是由-羧基-5-氯-8-羟基-3，4-二氢-3-R-甲基异香豆素(赭曲霉毒素α)和L-β-苯丙氨酸通过酰胺键连在一起的聚酮类化合物，耐酸性和高温环境，在自然环境中较难降解。一般通过断裂酰胺键，生成赭曲霉毒素α和L-β-苯丙氨酸达到解毒的效果。

目前对赭曲霉毒素A的控制方法包括物理方式、化学方式、生物方式。物理方式降解赭曲霉毒素A包括吸附和加热降解；吸附是常见的脱除毒素的方法，但是不能彻底降解毒素，使其残留在环境中，造成二次污染；加热也是脱除赭曲霉毒素A的有效方式，但是容易造成产品品质降低的问题。化学方式降解赭曲霉毒素A也是常见的脱毒方式，而且已经研究出的降解赭曲霉毒素A的化学方式多样化，如利用过氧化物酶(POD)、蛋白质和糖类降解赭曲霉毒素A，但是操作复杂，成本较高。

近年来，采用微生物及其产生的酶降解毒素成为研究的热点，虽然已有较多的酵母菌、乳酸菌和霉菌被发现具有降解赭曲霉毒素A的功效，但是发掘出来的降解酶的种类有限、而且降解效果不佳，因此，挖掘新的高效降解酶是非常必要的。

发明内容

针对现有技术的缺陷与不足，本发明提供一株分离筛选自土壤的隐球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3，基于隐球酵母Y3的胞内酶降解赭曲霉毒素A，其具有高安全性和极高的降解效果。

本发明所提供的降解赭曲霉毒素A的隐球酵母系从镇江市句容市果园收集的土壤中筛选分离到的，在NYDA固体培养基平板上28℃培养3d，进行形态学观察；已经对该菌株的5.8S rDNA-ITS区序列进行分析并进行了分子生物学鉴定。同时，本发明所提供的酵母菌株，现保藏于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M2017505，建议的分类命名为隐球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3。此外，本发明所利用的菌株申请人已经申请中国发明专利，CN201711183834.0，发明名称为：一株降解桔霉素的酵母菌及应用。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：