[发明专利]用于检测基因多态性的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测基因多态性的引物组，其特征在于，包括：下述4个引物对中的至少一个引物对；

用于检测ADRB1基因的rs1801253位点的引物对，其中，该引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

用于检测AGTR1基因的rs5186位点的引物对，其中，该引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.4所示；

用于检测CYP2C9*3基因的rs1057910位点的引物对，其中，该引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

用于检测CYP2D6*10基因的rs1065852位点的引物对，其中，该引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.用于检测基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括：如权利要求1所述的引物组。

3.基因多态性的检测方法，其特征在于，包括：

设计权利要求1所述的引物组，或，移取如权利要求2的试剂盒中的引物组；

从待测样本中提取基因组DNA作为扩增模板；

配制包含所述引物组和所述扩增模板的多重聚合酶链式反应PCR反应体系；

对所述多重PCR反应体系进行多重PCR扩增反应，得到PCR产物；

根据所述PCR产物，确定所述待测样本的ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、CYP2C9*3基因的rs1057910位点以及CYP2D6*10基因的rs1065852位点的基因型。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述根据所述PCR产物，确定所述待测样本的ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、CYP2C9*3基因的rs1057910位点以及CYP2D6*10基因的rs1065852位点的基因型，包括：

利用电泳检测所述PCR产物，获得所述PCR产物的扩增片段的大小；

当所述PCR产物的扩增片段的大小正确时，对所述PCR产物进行核苷酸序列测定，获得所述待测样本的ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、CYP2C9*3基因的rs1057910位点以及CYP2D6*10基因的rs1065852位点的基因型。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述多重PCR反应体系还包括：DNA聚合酶、PCR缓冲液、4种dNTP的混合物和超纯水；

其中，DNA聚合酶的用量为0.5～6U，每种dNTP的终浓度均为30～500μM，4个引物对中的每条引物的终浓度为10-500nM。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述DNA聚合酶包括：Taq聚合酶、KOD FX聚合酶、Pfu聚合酶或Phusion聚合酶。

7.根据权利要求3至6中任一所述的方法，其特征在于，

所述多重PCR反应体系的反应条件为：90～98℃条件下预变性30～400s；92～98℃条件下变性5～300s，52～68℃条件下退火10～90s，68～72℃条件下延伸10～300s，所述变性、所述退火和所述延伸循环25～45次；68～72℃条件下终延伸0～1800s。