[发明专利]一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的多肽及应用

说明书

本发明公开了一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的多肽及应用。所述多肽为Ku70蛋白截短体，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明利用突变PCR的方法，从Ku70蛋白内分离出可以有效抑制肿瘤增殖的多肽Ku70‑C。体外抗肿瘤活性检测表明，改造后的蛋白表现出良好的抗肿瘤增殖特性，可用于优化抗肿瘤多肽，为开发抗肿瘤药物提供模型。本发明多肽Ku70‑C只有74个氨基酸残基，分子量较小，免疫原性低、组织渗透性好。在医药领域具有一定的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的多肽及应用。

背景技术

传统的肿瘤治疗方法，多采用手术、射线或化学药物治疗手段，副作用大且容易复发，即使是新兴的肿瘤免疫疗法，仍然无法克服肿瘤治疗药物副作用大、易复发等缺点。寻找安全、有效的肿瘤靶向治疗药物是目前肿瘤治疗领域亟待解决的问题。

多肽药物免疫原性低，易于合成改造，组织渗透性好，已经表现出在肿瘤、心血管、免疫疾病等疾病治疗方面有很好的应用前景。目前全球有80余种多肽药物上市，近200种正在开展临床前试验。

多肽药物一般由几个到几十个天然或非天然氨基酸组成，能够通过天然产物提取、基因重组和化学合成等方式获得。除了直接用于治疗疾病，多肽药物还具有其他广泛的应用领域，比如作为药物载体输送药物，分子探针检测疾病，或作为小分子药物的模型，为开发靶向小分子药物提供结构基础。

Ku70蛋白由XRCC6（X-ray repair complementing defective repair inChinese hamster cells 6）基因转录翻译而成，其与肿瘤的发生发展、浸润、转移关系密切。研究显示，Ku70在交界性和恶性卵巢浆液性组织中的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢囊腺瘤，在直肠癌组织中的表达明显高于直肠粘膜，在宫颈癌、胰腺癌等组织中Ku70的表达明显高于正常组织，且其表达情况还与肺癌、前列腺癌等肿瘤预后相关。肿瘤分子遗传学的研究，更是提供大量Ku70与胃癌、肝癌、儿童白血病等肿瘤易感性相关的证据，表明Ku70可能参与肿瘤发生过程。

Ku70蛋白被研究得最为广泛的生物学功能，是其与Ku80蛋白构成异构二聚体，参与DNA双链断裂的修复。除了NHEJ依赖型生物学功能外，Ku70还被发现有NHEJ非依赖型生物学功能：Ku70可诱导肿瘤发生上皮细胞-间充质转化（EMT）或促肿瘤细胞增殖，参与肿瘤的发生发展；Ku70还可与Bax蛋白结合，阻止Bax诱导细胞凋亡。

公开号为CN111333712A的发明公开了一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的Ku70蛋白突变体、基因及应用。所述Ku70蛋白突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用Ku70蛋白对肿瘤细胞增殖的影响，通过人工改造，构造了可以有效抑制肿瘤增殖的变异型Ku70蛋白Mu4。体外抗肿瘤活性检测和动物实验都表明，改造后的蛋白表现出良好的抗肿瘤增殖特性，可用于研究Ku70参与肿瘤细胞增殖的作用机理，为开发抗肿瘤药物提供理论基础和模型。变异型Ku70蛋白Mu4对肺癌或宫颈癌细胞系的增殖抑制效果明显，而对肝癌、结肠癌细胞系及非癌细胞系没有明显的抑制效果。然而，该申请中Mu4共572个氨基酸，整体分子量较大，有待进一步改进。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的技术问题，从Ku70蛋白内分离出一段多肽，构建表达该多肽的表达质粒，可通过脂质体转染细胞的方式，在肿瘤细胞内过表达多肽，并抑制肿瘤细胞增殖，表明此多肽具有潜在的开发药物价值。

一种具有抑制肿瘤细胞增殖功能的多肽，为Ku70蛋白截短体，氨基酸序列如SEQID No.1所示。该多肽为Ku70蛋白的C端截短体，共包括C端的74个氨基酸。

本发明又提供了所述多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，其中肿瘤为肺癌或宫颈癌。

本发明又提供了编码所述多肽的基因。优选的，所述的基因，核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。