[发明专利]鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该方法根据鸭新型微核糖核酸病毒基因组保守序列设计引物组：外引物(DUMV‑F3和DUMV‑B3)、内引物(DUMV‑FIP和DUMV‑BIP)和环引物(DUMV‑LB)。具体序列分别见SEQ ID NO.1‑5。根据所设计的引物组建立一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。该试剂盒检测方法与鸭常见传染病病原不发生交叉反应。本发明的检测方法特异性强、准确性好、灵敏度高，无需昂贵仪器设备，便于基层临床现场使用，方便快速。

技术领域

本发明属于禽病学检测领域，具体涉及一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒。

背景技术

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是应用4-6条特异性引物，通过BstDNA聚合酶，在水浴锅中对靶基因进行的一种恒温扩增技术，该技术具有扩增特异性强、灵敏度高、操作快速简便、检测简单等特点，摆脱了对PCR仪、实时荧光定量PCR仪等昂贵仪器的依赖，在基层单位的检测更加方便。相对于现有的其他核酸扩增技术，LAMP具有许多独特的优点：①LAMP技术扩增的特异性非常高，使用的特异性引物可以识别目的序列上特异性的区域，对目的序列具有高度的选择性，减少了非靶标序列的影响。②LAMP技术可以在等温条件下实现扩增，减少了对昂贵、精密实验仪器的要求，同时扩增效率高。仅需要普通水浴锅调节温度(60℃～65℃)，大大降低了检测的费用，特别适合基层和现场使用。③LAMP技术阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀，扩增产物的检测方法多样，可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加入荧光显色试剂，根据颜色的变化通过荧光照射装置进行紫外光照射检测进行分析。

微核糖核酸科(Picornaviridae Family)病毒是重要的人畜共患病原体,它会导致人和动物出现亚临床感染或从轻度发热到心脏、肝脏和中枢神经系统的严重疾病。微核糖核酸科病毒是一类二十面体对称、呈球形，直径约20-30nm、无囊膜的单股正链RNA病毒。微核糖核酸科病毒包含63个病毒属，常见的有口蹄疫病毒属(Aphthovirus)、肠病毒属(Enterovirus)、心病毒属(Cardiovirus)、肝病毒属(Hepatovirus)等。微核糖核酸科病毒基因长度一般为6.6kb-9.8kb，基因组一般仅含有一个大的开放阅读框(open readingframe，ORF)，3’端为Poly A尾，5’端有VPg蛋白与之共价结合，基因组RNA有感染性。近年来，随着病毒宏基因组学研究的不断深入，归属于微核糖核酸科Megrivirus属的病原先后从火鸡、鸡、鸽子和鸭中发现。基因组学分析发现，鸭新型微核糖核酸病毒(duck megrivirus,DuMV)的基因组结构特征和火鸡源Megrivirus、鸡源Megrivirus相似，且其聚蛋白含有典型微核糖核酸科病毒的特征性基序。遗传进化分析表明，鸭新型微核糖核酸病毒(DuMV)与Megrivirus属的火鸡、鸡、鸽子源新型微核糖核酸病毒处于同一遗传进化分支。

目前，还未见针对鸭新型微核糖核酸病毒(DuMV)环介导等温扩增(LAMP)反应方法的相关研究报道，本发明的建立可填补国内外相关领域空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒，利用该引物组可以特异性的检测鸭新型微核糖核酸病毒，为基层和现场提供一种简便、快捷的检测鸭新型微核糖核酸病毒的方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种鸭新型微核糖核酸病毒环介导等温扩增检测引物组，其由外引物(DUMV-F3和DUMV-B3)、内引物(DUMV-FIP和DUMV-BIP)、环引物(DUMV-LB)组成，上述引物序列如下：

DUMV-F3：5’-AGAGATGTCATTCTGGGGTGA-3’，

DUMV-B3：5’-GCCATCTTCAAACATGGGAAC-3’，