[发明专利]细胞冻存剂及细胞的冻存方法

说明书

本发明涉及一种细胞冻存剂及细胞的冻存方法。该细胞冻存剂不含血清，包括稳定剂、二甲基亚砜、小分子化合物和基础培养基，稳定剂的质量、二甲基亚砜的体积、小分子化合物的体积和基础培养基的体积之比为(0.5mg～21mg)：100μL：(1μg～10μg)：(700μL～890μL)，稳定剂选自甲基纤维素、羟甲基纤维素和羧甲基纤维素中的至少一种，小分子化合物选自毛喉素、槲皮素、奥替普拉和二甲双胍中的至少一种。上述细胞冻存剂的安全性高且使用上述细胞冻存剂的细胞的存活率高、复苏率高。

技术领域

本发明涉及细胞冻存技术领域，特别是涉及一种细胞冻存剂及细胞的冻存方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，它能够发育成硬骨、软骨、脂肪等不同类型的细胞，已为细胞治疗的重要候选种子细胞。在临床上细胞移植的供体和受体往往存在不同时性，很难保证即离即用。因此，间充质干细胞的冻存尤为重要。

一般地，间充质干细胞冻存主要是采用冻存剂对间充质干细胞进行保护，以减少冷冻过程中间充质干细胞的损伤。目前，间充质干细胞的冻存剂主要是包含二甲基亚砜的完全培养基，但由于完全培养基中的血清一般为动物来源的胎牛血清，临床应用时的安全风险较高。近期虽然出现了用人来源的血制品替代胎牛血清的冻存剂，但该冻存剂仍要面临供体病毒污染和免疫原性等问题，安全性还有待进一步提高。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够提高冻存细胞的安全性的细胞冻存剂。

此外，还有必要提供一种细胞的冻存方法，经该方法冻存的细胞在临床使用时安全性高。

一种细胞冻存剂，所述细胞冻存剂不含血清，所述细胞冻存剂包括稳定剂、二甲基亚砜、小分子化合物和基础培养基，所述稳定剂的质量与所述二甲基亚砜的体积和所述小分子化合物的质量以及所述基础培养基的体积之比为(0.5mg～21mg)：100μL：(1μg～10μg)：(700μL～890μL)，所述稳定剂选自甲基纤维素、羟甲基纤维素和羧甲基纤维素中的至少一种，所述小分子化合物选自毛喉素、槲皮素、奥替普拉和二甲双胍中的至少一种。

上述细胞冻存剂不含血清，可以避免由动物血清带来的临床风险，安全性高，并且上述细胞冻存剂中的稳定剂和二甲基亚砜相互配合，可减少细胞冻存和复苏过程中细胞内冰晶形成，降低冷冻损伤，使复苏后的细胞保持正常的细胞形态和较高的细胞活力，此外，毛喉素、槲皮素、奥替普拉和二甲双胍等小分子化合物的引入会使得上述细胞冻存剂的冻存效果有显著提升。

在其中一个实施例中，所述稳定剂的质量与所述二甲基亚砜的体积和所述小分子化合物的质量以及所述基础培养基的体积之比为(0.5mg～21mg)：100μL：(1μg～10μg)：(800μL～890μL)。

在其中一个实施例中，在所述小分子化合物中，毛喉素、槲皮素、奥替普拉和二甲双胍的质量之比为(1～20)：(0.1～2)：(0.1～4)：(0.1～10)。

在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂中包括小分子化合物，所述稳定剂与所述小分子化合物的质量之比为1：(0.0001～0.01)。

在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂还包括聚乙烯吡咯烷酮、糖、多元醇和氨基酸中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂包括聚乙烯吡咯烷酮，所述稳定剂与所述聚乙烯吡咯烷酮的质量之比为1：(4～6)。

在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂还包括糖，所述稳定剂与所述糖的质量之比为1：(5～15)；

在其中一个实施例中，所述糖选自葡萄糖、麦芽糖、木糖、海藻糖及蔗糖中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂中还包括多元醇，所述稳定剂的质量与所述多元醇的体积之比为1mg：(200μL～500μL)；