[发明专利]一种硫酸葡聚糖钠诱导白色念珠菌预先定植的结肠炎模型的构建方法

说明书

一种硫酸葡聚糖钠诱导白色念珠菌预先定植的结肠炎模型的构建方法，包括下列步骤：步骤1：将浓度为0.8‑1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液灌入SPF级6‑8周的小鼠；步骤2：给予小鼠自由饮用质量分数为3%的硫酸葡聚糖钠水溶液7 d，期间断绝其他饮水，且每隔1 d更换新鲜的质量分数为3%的硫酸葡聚糖钠水溶液；步骤3：然后连续4天，每天上午9时给予白念株菌灌胃，1.0×10⁸ CFU/只，生理盐水自由饮用，标准颗粒饲料自由饮食；从第5天起，停止白念株菌灌胃且开始自由饮用质量分数为3%的硫酸葡聚糖钠水溶液7 d，期间停止饮水，自由饮食；室温18‑22℃，相对湿度55%‑70%，形成结肠炎模型。本发明采用自由饮用DSS（MW:36000~50000）水溶液的方法建立动物模型，简单易行。

技术领域

本发明属于实验用动物模型构建技术领域，涉及一种硫酸葡聚糖钠诱导白色念珠菌预先定植的结肠炎模型的构建方法。

背景技术

日本学者于1985年首次应用葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS）制备了鼠溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）模型，此后该方法广泛用于筛选治疗炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease，IBD）的新方法和临床前新药物的开发，也用于研究IBD的发病机制。与健康人相比，UC患者肠道真菌数量更多，种类更丰富，其中最常见的是念珠菌属的改变。Zwolinska-Wcislo等通过培养法发现UC患者粪便中真菌增多，肠道念珠菌属定植率更高，在肠黏膜上定植的念珠菌中91%为白念珠菌。Ott等分析了47名对照和57例IBD患者结肠黏膜样本的真菌，用DGGE法发现与对照组相比IBD患者消化道念珠菌属（特别是杜氏念珠菌和近平滑念珠菌）增多，表明真菌生态失调与该疾病相关。有数据表明在肠道炎症过程中粪便菌群移植（FMT）可能通过减少念珠菌丰度和肠道真菌诱导的促炎反应而发挥作用。Rakoff等研究证明宿主先天免疫和肠道微生物之间的相互作用是决定DSS诱导的肠道发病机制的关键。该模型的建立可用于研究先天性免疫系统在结肠炎发生的作用，为研究宿主遗传、肠道先天免疫、微生物、饮食和其他环境因素之间的相互作用的机制提供支持。

DSS诱发结肠炎模型的常见用途包括研究先天免疫系统如何参与肠道炎症，以及寻找在损伤期间/之后维持或重建上皮完整性的重要环节。肠道黏膜免疫紊乱以及肠道菌群失调与溃疡性结肠炎的发病有密切关系，一旦肠道菌群发生比例失调或者定位转移，就会加重肠道疾病、促进人体过快衰老，甚至导致癌症的发生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种硫酸葡聚糖钠诱导白色念珠菌预先定植的结肠炎模型的构建方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种硫酸葡聚糖钠诱导白色念珠菌预先定植的结肠炎模型的构建方法，包括下列步骤：

步骤1：将浓度为0.8-1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液灌入SPF级6-8周的小鼠；

步骤2：给予小鼠自由饮用质量分数为3% 的硫酸葡聚糖钠水溶液7 d，期间断绝其他饮水，且每隔1 d更换新鲜的质量分数为3% 的硫酸葡聚糖钠水溶液；

步骤3：然后连续4天，每天上午9时给予白念株菌灌胃，1.0×10⁸ CFU/只，生理盐水自由饮用，标准颗粒饲料自由饮食；从第5天起，停止白念株菌灌胃且开始自由饮用质量分数为3% 的硫酸葡聚糖钠水溶液7 d，期间停止饮水，自由饮食；室温18-22℃，相对湿度55%-70% ，形成结肠炎模型。

优选的技术方案为：小鼠为C57BL/6小鼠或BALB/c小鼠。

优选的技术方案为：步骤1中，浓度为0.8-1.2×10⁹ CFU/mL的白念珠菌菌液的用量为0.2-0.5mL/只。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：