[发明专利]动物细胞的灌流培养方法

说明书

本发明涉及一种动物细胞的灌流培养方法，该动物细胞的灌流培养方法包括以下步骤：将基础培养基和补料培养基混合后灌流培养动物细胞；以及收获生物物质；其中，基础培养基为Growth A，补料培养基为Feed 4，基础培养基与补料培养基的体积之比为(80～90)：(10～20)，上述动物细胞的灌流培养方法可以促进动物细胞增殖，提高动物细胞分泌的治疗性蛋白的产量。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别是涉及一种动物细胞的灌流培养方法。

背景技术

近年来，生物药技术发展越来越快，生物药的市场需求也越来越大，随着对以哺乳动物细胞为载体所生产的生物制品(例如蛋白质类、生长因子、疫苗或单克隆抗体等)的需求量不断加大，大规模动物细胞培养技术也越来越被关注。

常见的动物细胞培养方法包括分批培养、分批补料培养和灌流培养。分批培养是将细胞及培养基一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后，终止培养。分批补料培养是指先将一定量的培养基装入反应器，在适宜的条件下接种细胞，进行培养，使细胞不断生长，产物不断形成，在此过程中，随着营养物质的不断消耗，不断向反应容器中补充新的营养成分，使细胞进一步地代谢，直到整个培养结束后取出产物。分批补料培养只是向反应容器中补加必要的营养成分，以维持营养物质的浓度不变。灌流培养是将细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成的过程中，不断地将部分培养基取出，同时不断地灌注新的培养基。灌流培养作为目前哺乳动物细胞培养的重要工艺之一，不仅可以通过不断排出细胞代谢副产物提供有利于细胞培养的稳定环境，解决蛋白质量不稳定或者表达量偏低等问题，还可以通过提高单位体积产率来优化产能利用率并提高生产效率。

目前市场上商品化的灌流培养基品种较少，且与构建好的细胞匹配性有待验证，还缺少能促进表达治疗性蛋白的细胞生长和分泌治疗性蛋白的灌流培养基。

发明内容

基于此，有必要提供一种动物细胞的灌流培养方法，采用该灌流培养方法培养动物细胞时，动物细胞增殖快，且利于细胞分泌治疗性蛋白。

一种动物细胞的灌流培养方法，包括以下步骤：

将基础培养基和补料培养基混合后灌流培养动物细胞；以及

收获生物物质；

其中，所述基础培养基为Growth A，所述补料培养基为Feed 4，所述基础培养基与所述补料培养基的体积之比为(80～90)：(10～20)。

上述动物细胞的灌流培养方法中，采用的灌流培养基包括Growth A和Feed 4且两者的体积比设置为(80～90)：(10～20)，通过Growth A和Feed 4的配合，能够促进动物细胞增殖，提高动物细胞的细胞密度，并还能够促进动物细胞分泌治疗性蛋白，提高治疗性蛋白的产量。上述动物细胞的灌流培养方法对分泌抗CD20抗体的CHO细胞的培养效果尤为明显。

在其中一个实施例中，所述基础培养基与所述补料培养基的体积之比为90：10。

在其中一个实施例中，从灌流培养的第15天～第16天开始，所述基础培养基与所述补料培养基的体积之比为(80～85)：(20～15)。

在其中一个实施例中，从灌流培养的第15天～第16天开始，所述基础培养基与所述补料培养基的体积之比为80：20，从灌流培养的第17天～第18天开始，所述基础培养基与所述补料培养基的体积之比为85：15。

在其中一个实施例中，所述动物细胞的接种密度为0.2×10⁶个/mL～2×10⁶个/mL。

在其中一个实施例中，所述灌流培养的灌流速率为0.5VVD～2VVD。

在其中一个实施例中，所述灌流培养温度为31℃～37℃。