[发明专利]鉴别宽体金线蛭的PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种鉴别宽体金线蛭的PCR检测试剂盒。属于核酸检测领域。本发明的试剂盒主要依赖其特异性的引物对(序列如SEQ ID NO.1～2所示)，可对宽体金线蛭进行检测鉴别；检测快速、准确，而不对其它水蛭品种产生非特异性反应，也不会受寄主血液的干扰，一次反应可以将目标水蛭品种鉴别出来。

技术领域

本发明属于核酸检测领域。

背景技术

水蛭俗称蚂蟥，是蛭纲动物的总称，是一味用于破血通经、逐瘀消瘾的传统中药，在临床广泛用于中风后遗证、脑血栓等的治疗。国际上将吸食哺乳动物血液，其唾液腺分泌物中含有水蛭素等多种生物活性物质，并且在医药上具有广阔应用前景的蛭类动物统称为医学蛭类。《中国药典》2015版收载的入药品种为水蛭科的宽体金线蛭(Whitmania pigraWhitman)、水蛭(Hirudonipponia Whitman，以下称为日本医蛭)及尖细金线蛭(WhitmaniaacranulataWhitman)(国家药典委员会.中华人民共和国药典(第一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2015.)。然而，水蛭的市场需求和高昂的价格导致市场上菲牛蛭(Poecilobdella manillensis Lesson)、棒纹牛蛭(Poecilobdella javanica Wahlberg)、光润金线蛭(Whitmania laevis Baird)等伪品以次充好的现象十分普遍，且这些近缘物种仅依靠形态特征难以区分和鉴定，影响了药品的安全性和有效性。

传统的水蛭鉴定方法基于完整水蛭的形态特征或薄层色谱对其进行分析，近代的分析方法多依赖于高成本、复杂的仪器，如高效液相色谱指纹图谱和气相色谱/质谱联用技术被广泛应用于特征小分子的检测，而电泳或生物质谱联用技术常被应用于特征蛋白或特定肽段的检测。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种鉴别宽体金线蛭的PCR检测试剂盒。

本发明的技术方案如下：

一种鉴别宽体金线蛭的PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.1～2所示。

前引物在制备宽体金线蛭鉴别试剂盒中的用途。

如前述的用途，所述试剂盒除包括序列如SEQ ID NO.1～2所示的引物以外，还包括Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg²⁺、PCR反应缓冲液。

如前述的用途，所述试剂盒工作时的退火温度为60℃。

如前述的用途，所述试剂盒是将宽体金线蛭与日本医蛭、尖细金线蛭、菲牛蛭相区分的试剂盒。

一种鉴别宽体金线蛭的PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括序列如SEQ ID NO.1～2所示的引物。

进一步地，所述试剂盒还包括Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg²⁺、PCR反应缓冲液。

进一步地，所述试剂盒工作时的退火温度为60℃。

前述的引物在鉴别宽体金线蛭中的用途。

进一步地，所述鉴别是将宽体金线蛭与日本医蛭、尖细金线蛭、菲牛蛭相区分。

本发明的有益效果：

首先，本发明引物对特异性良好，利用其进行PCR，不与目标以外的DNA片段产生非特异性反应，并且扩增得到的PCR产物可以明显区分，可以用于快速、准确的鉴别宽体金线蛭品种真伪，而不对其它水蛭品种产生非特异性反应，一次反应可以将目标水蛭品种鉴别出来。

其次，本发明的引物对灵敏度高。在使用凝胶电泳成像时，其最低检测限低至0.1ng DNA。