[发明专利]一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法

说明书

本发明提供一种检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。本发明将待测样品进行前处理后进行HPLC‑MS/MS检测；目标化合物经酸化乙腈提取、QuEChERS技术净化及复溶后直接上机测定，前处理操作简单。优化后的方法基质效应低，简化了实验步骤。本发明方法简便、灵敏适用于牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的测定，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于检测分析技术领域，具体涉及一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。

背景技术

己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)是一种人工合成的雌酚类激素，能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用。在养殖产业中，己烯雌酚曾一度作为促生长剂加入饲料中，刺激奶牛正常的生成代谢，增加奶牛体内氯停留，提高奶牛体内氨基酸合成蛋白质的速度，最终达到提高牛奶产率的目的。研究表明，残留于动物源性食品中的己烯雌酚通过食物链进入人体后，属于环境内分泌干扰物,它对垂体促性腺激素的分泌有抑制作用，破坏人体内正常激素平衡。其副作用可以破坏集体遗传物质，导致基因突变，引发机体肿瘤，且在体内滞留时间长、稳定性强、难降解。欧盟已禁止使用，美国和加拿大则限量使用。中华人民共和国农业农村部公告第250号也将其列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》。

现有的牛奶和奶粉中己烯雌酚的仪器分析检测方法有液相色谱法和液相色谱串联质谱法，液相色谱法无法准确定性，检测灵敏度低，而液相色谱串联质谱法通常前处理过程相对繁琐，耗时较长以GB/T 22992-2008《牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法》为例，前处理过程需氢氧化钠调节pH后，经阴离子固相萃取柱净化，耗时较长，耗材成本较高。因此，开发一个快速高效的检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法对于保障人民的食品安全有十分重要的意义。

发明内容

为解决现有技术中缺陷，本发明提供一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法。该方法灵敏度高，稳定性高，操作简单，效率高，并且检出限更低。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于高效液相色谱串联质谱法检测牛奶和奶粉中己烯雌酚残留量的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)配制标准品溶液：首先制备标准储备液，称取适量的己烯雌酚标准品，用甲醇配制成浓度为10μg/L的标准储备液，于-18℃冰箱中保存；然后将标准储备液用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存，再将标准中间液用甲醇配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存；

制作标准曲线时将标准工作液用空白基质溶液配制成浓度分别为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL的工作曲线，现用现配。

(2)醋酸乙腈溶液：吸取10ml的醋酸用乙腈定容到1000ml的容量瓶中配制成浓度为1％的醋酸乙腈溶液。

(3)10％甲醇水(含0.1％的甲酸)溶液：10ml甲醇加水定容到100ml，加入100μl甲酸，配制成10％甲醇水含0.1％的甲酸溶液。

(4)待测样品前处理：

A.提取：称取牛奶或奶粉2g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，回收中另加入100ng/mL己烯雌酚标准溶液10μL，1％醋酸乙腈溶液15mL(含油脂较多的样品加10mL正己烷)。涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min，在转速为4000r/min的离心机中离心5min；