[发明专利]一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法

说明书

本发明提供了一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法，该方法为：将烘干的桦褐孔菌粉碎后加乙醇或者丙酮浸泡，离心或抽滤后减压烘干后超微粉碎，用乙酸乙酯处理，用乙醇水溶液水浴回流后，将沉淀物质干燥得到得到处理后的桦褐孔菌，然后经过脱纤维素粗多糖提取、木瓜蛋白酶脱蛋白、醇沉、脱色和纯化，得到桦褐孔菌多糖。本发明桦褐孔菌子实体多糖的得率高，并且能够有效地去除蛋白和色素，适合产业化生产桦褐孔菌多糖。

技术领域

本发明属于桦褐孔菌多糖提取纯化技术领域，具体涉及一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法。

背景技术

桦褐孔菌多糖具有增强免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖及抗病毒等多种药理活性。但目前对桦褐孔菌多糖的分离纯化的研究报道相对较少。由于多糖的组成复杂性，多糖粗提物的分子量分布较广，多糖种类也很多，提取后的桦褐孔菌粗多糖中含有一定量的蛋白和色素，影响多糖的化学结构和生物活性研究，但去除粗多糖中的蛋白和色素，一直是多糖分离纯化中的一大难题，传统的去蛋白Sevage法，方法操作繁琐，效率低，只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损失；活性炭法去除色素效果较好，但后期的活性炭粉末不易去除，过氧化氢法因为较强的抗氧化活性去除色素效果很好，但对多糖的活性影响较大，因此急需探索一种新的精制方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法，该方法桦褐孔菌子实体多糖的得率高，并且能够有效地去除蛋白和色素，适合产业化生产桦褐孔菌多糖。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种桦褐孔菌多糖的提取和纯化方法，该方法为:

S1、初步处理：从白桦树上采集桦褐孔菌子实体，在温度为40℃～50℃的条件减压烘干至水分含量为10％～12％，得到烘干的桦褐孔菌；

或者将桦褐孔菌菌种经发酵后得到桦褐孔菌菌丝体，烘干、粉碎后，加入2倍质量的石油醚脱脂后抽滤，在温度为40℃～50℃的条件减压烘干至水分含量为10％～12％，得到烘干的桦褐孔菌；

将烘干的桦褐孔菌粉碎后过40目筛，加入2倍质量的乙醇或者1.5倍质量的丙酮浸泡6h～8h后，离心或抽滤后得到固形物a，在温度为50℃～60℃的条件下减压烘干至水分含量为8％～10％，超微粉碎，过200目筛，得到待处理粉体，加入乙酸乙酯，离心或者抽滤后得到固形物b，然后加入质量分数为90％的乙醇水溶液，在温度为70℃的条件下水浴回流2h后，离心后得到沉淀物质a，将所述沉淀物质a在温度为50℃的条件下干燥12h，得到处理后的桦褐孔菌；

S2、脱纤维素粗多糖提取：向S1中得到的处理后的桦褐孔菌中加入pH值为5.0的磷酸盐缓冲液a，升温至55℃，超声15min，然后加入纤维素酶，得到初混液，在温度为55℃的条件下酶解2h后，在温度为90℃的条件下灭酶10min，然后加入蒸馏水，在温度为70℃、超声功率为400W、频率为40kHz的条件下超声30min，然后在转速为4000rpm的条件下离心20min，收集滤液a，将剩余的沉淀物质重复S2步骤中的上述操作，收集得到滤液b,合并滤液a和滤液b，得到脱纤维素粗多糖提取液；

S3、木瓜蛋白酶脱蛋白：将S2中得到的脱纤维素粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶，得到混合液，在温度为45℃的条件下酶解1h～2h后，在温度为90℃的条件下灭酶10min，加入pH值为5.0的磷酸盐缓冲液b，然后在温度为50℃、转速为3500r/min的条件下离心10min，取上清液a，加入浓度为0.025mol/L的三氯乙酸水溶液，静置1h，振荡后，在温度为50℃、转速为3500r/min的条件下离心10min，将上清液过截留分子量为100KD的陶瓷透析膜脱大分子后，过截留分子量为100Da～200Da的聚酰胺膜脱盐，得到脱纤维素脱蛋白多糖提取液；