[发明专利]一种沙门菌PagC蛋白的抗原表位肽

说明书

本发明公开了一种沙门菌PagC蛋白的抗原表位肽，合成属间特异的含有线性表位的氨基酸序列DRQASGSVEPEGIH和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA做为筛选抗原，得到抗原表位在线性的P1序列上的单抗细胞株J，筛选到的mAb J抗原表位P1在沙门菌属内保守、属间特异。本发明通过制备单克隆抗体，能够用于建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法，具有特异性好，灵敏度高的特点，具有广泛推广的潜力。

技术领域

本发明涉及兽医学技术领域，具体为一种沙门菌PagC蛋白的抗原表位肽。

背景技术

沙门菌是寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌，主要引起人类的伤寒、副伤寒、急性胃肠炎和败血症等疾病，感染动物可导致败血症、胃肠炎及其他组织局部炎症，严重危害公共卫生及畜禽养殖安全。我国已将养殖环境中沙门菌的净化工作列为重点发展项目，净化工作的前提首先需要精准检测手段的支持，现在临床上广泛使用的沙门菌检测方法主要是玻片凝集试验，该方法操作方便快捷且成本低，但是检测通量低且对于抗体滴度较低的血清样本敏感性不足，易出现假阴性，结果判定主观性较强且存在与其他肠杆菌科细菌的交叉反应问题，容易出现假阳性结果，因此该方法很难为我国沙门菌病的净化工作提供有力支撑，亟需开发新型的检测方法来替代这一传统检测手段。

酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)作为一种通量高，灵敏性强的血清学检测方法已经为大家所熟知，建立一种沙门菌抗体ELISA检测方法可以有效的提高沙门菌的临床检测效率和准确性，但是由于肠杆菌科细菌交叉反应严重，在建立ELISA方法过程中首先需要克服这一难题。现有沙门菌抗体ELISA检测方法选用的检测抗原主要是O抗原和H抗原，但是O和H抗原表位复杂，用于ELISA抗体检测仍然存在着交叉反应性。单克隆抗体阻断ELISA检测沙门氏菌抗体的方法具有酶联免疫吸附试验的高度敏感性、快速性、简单性和单克隆抗体的高度特异性，可以避免肠杆菌科细菌血清学检测过程中的交叉反应问题。

单克隆抗体是建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法的核心，需要筛选出针对沙门菌属保守抗原特异性强且与其余肠杆菌科细菌均无交叉反应的单克隆抗体。本实验室通过生物信息学方法，初步筛选出4个沙门菌属内保守蛋白PagC、Tft、FimA和InvA。其中外膜蛋白PagC的保守性最好，在属内的同源性可达到95％以上，属间与其他细菌的同源性在68％以下。已有报道PagC具有良好的免疫原性和免疫反应性，因此，外膜蛋白PagC可以作为免疫原制备单克隆抗体。进一步分析找到了存在于PagC蛋白中的属内保守，属间特异的含有线性表位的氨基酸序列，DRQASGSVEPEGIH(P1)和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA(P2)，以此为基础合成多肽进行单克隆抗体的筛选工作。

基于上述考虑，本发明人通过大量实验，制备了抗原表位为线性的DRQASGSVEPEGIH(P1)单克隆抗体细胞株J和抗原表位为线性的FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA(P2)的单抗细胞株1G6和3E5。以期作为沙门菌抗体阻断ELISA检测方法建立的候选单抗细胞株。

发明内容

本发明的目的是制备沙门菌属内保守、属间特异的单克隆抗体，并用于建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种沙门菌PagC蛋白单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤S1，通过使用纯化的PagC蛋白免疫Balb/c小鼠，按照常规的杂交瘤细胞制备技术，得到了6株PagC蛋白单克隆抗体，A、B、C、D、I、J；

步骤S2，以PagC蛋白中的属内保守，属间特异的含有线性表位的氨基酸序列，DRQASGSVEPEGIH(P1)和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA(P2)为筛选抗原，得到抗原表位在线性的P1序列上的单抗细胞株J，其他5株单抗表位都不在线性的P1和P2氨基酸序列上；