[发明专利]一种伪狂犬病病毒gB-gC表位串联体及其应用

说明书

本发明提供一种伪狂犬病病毒gB‑gC表位串联体及其应用，通过筛选克隆FJ‑2012毒株gB、gC主要抗原表位基因，优化密码子组成串联体，人工合成其cDNA序列，并通过NcoI、EcoRI酶切位点克隆至原核表达载体pET‑28a(+)多克隆位点，转化至BL21（DE3）感受态细胞，质粒测序及酶切的结果说明构建gB‑gC抗原表位串联基因重组表达质粒，IPTG诱导2h后即可成功表达gB‑gC重组蛋白，Elisa检测其该抗血清效价可以达到1:6400。表明PRV抗原串联表位基因原核表达载体构建成功并获得了PRV抗血清，这为PRV表位筛选、PRV多表位疫苗及诊断试剂的研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于畜牧兽医技术领域，具体涉及一种伪狂犬病病毒gB-gC 表位串联体及其应用。

背景技术

猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）是一种猪神经性疱疹病毒(Ye etal., 2018)。尽管猪是PRV的天然宿主，但还可以感染多种哺乳动物，包括反刍动物、食肉动物和啮齿动物。它是家畜重要的神经系统致病菌，感染PRV的动物可能死于中枢神经系统疾病(Tirabassi Enquist, 2000 )。PRV感染对养猪业构成严重威胁，通常使用减毒活疫苗或灭活疫苗来控制疾病(Freuling et al., 2017)。自2011年以来，中国Bartha-K61接种疫苗的养猪场再次出现由PRV基因变异引起的伪狂犬病，并分离获得PRV新型毒株FJ-2012株(Wu et al., 2017)。先前的研究表明，PRV-barthak61疫苗未能阻止猪体内针对强毒力PRV株的病毒释放(Wang et al., 2014; Tong et al., 2015)。

PRV基因组为线状双链DNA，大小为150kb，G+C含量高达75%，含有72个阅读框，共编码70-100种蛋白，目前已知的编码糖蛋白11中，其中gB、gC蛋白与宿主的免疫应答密切相关(Iglesias et al., 1992)。gB、gC糖蛋白均为囊膜蛋白，广泛分布于病毒颗粒的囊膜表面，具有高度保守性，能够诱导机体产生高水平的中和抗体，gB或gC蛋白的亚单位疫苗均可保护小鼠或猪免受PRV感染，具有良好的免疫原性和反应原性，是构建重组DNA疫苗和疫苗免疫检测的首选蛋白。多表位亚单位疫苗是近几年来新兴发展的一种疫苗研制技术。表位疫苗以抗原表位为基础制备的疫苗，相对传统疫苗，表位疫苗是诱发的免疫应答针对性强，无毒、比较稳定，并易于生产、储藏和使用，是今后疫苗发展的方向(Deng et al., 2015)。因此可以设计基于gB-gC 序列的新基因作为疫苗候选的抗原，或者选择能够刺激机体产生保护性体液免疫反应的gB-gC 抗原表位片段作为诊断抗原，用于PRV抗体的检测和表位疫苗的研制。

本申请首次将PRV上抗原表位基因gB-gC 串联，重组至pET-28a（+）载体上，构建pET-28a（+）-gB-gC 原核重组表达质粒，并转化到BL21(DE3)诱导表达，制备兔抗血清，为PRV诊断试剂盒的开发和PRV多表位疫苗的研究奠定了基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种伪狂犬病病毒gB-gC 表位串联体及其应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种伪狂犬病病毒gB-gC 表位串联体，所述表达串联体其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。编码伪狂犬病病毒gB-gC 表位串联体的基因，序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的伪狂犬病病毒gB-gC 表位串联体在制备PRV诊断试剂盒及疫苗中的应用。

本发明的优点在于：