[发明专利]一种抗菌肽依色格南的片段固相合成方法

权利要求书

1.一种依色格南的片段固相合成方法，该方法包括如下步骤：

(1)采用Fmoc/tBu固相合成，利用偶联剂按照依色格南片段7-12的氨基酸序列将Fmoc-氨基酸连接至溶胀后的羧基树脂上，得到全保护六肽肽树脂；所述连接至羧基树脂上的Fmoc-氨基酸依次是：Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH和Fmoc-Cys(Trt)-OH；所述的全保护六肽肽树脂经碘氧化形成第一对二硫键，再经全保护裂解得Fmoc-c(Cys-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Phe-Cys)-OH，记作Fmoc-(7-12)-OH；

(2)采用Fmoc/tBu固相合成，利用偶联剂，按照依色格南的氨基酸序列，将Fmoc-氨基酸和步骤(1)所得的Fmoc-(7-12)-OH连接至溶胀后的氨基树脂上，得到全保护十七肽肽树脂；所述连接至氨基树脂的顺序依次是：Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-(7-12)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH和Fmoc-Arg(pbf)-OH；所述的全保护十七肽肽树脂经碘氧化形成第二对二硫键，脱Fmoc保护基得具有两对二硫键的全保护十七肽肽树脂；

(3)将步骤(2)得到的全保护十七肽肽树脂用裂解液切割，同时脱去所有侧链保护基，再以冰乙醚沉淀切割液获得依色格南粗品；

(4)将步骤(3)得到的依色格南粗品溶液过滤、分离纯化和冷冻干燥，获得依色格南三氟醋酸盐或依色格南醋酸盐。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的羧基树脂选自以下几种中的任意一种：2-Chlorotritylchloride树脂(2-CTC树脂)、HMPB树脂、HAL树脂或Rink-Ac树脂；优选的方案中，树脂的取代值为0.1～1.5mmol/g，树脂的颗粒大小为100～400目；步骤(2)所述的氨基树脂选自以下几种中的任意一种：Rink Amide-AM树脂、Sieber Amide树脂、PALAmide树脂、Knorr树脂、Knorr-2-Chlorotrityl树脂或Rink Amide-MBHA树脂；优选的方案中，树脂的取代值为0.1～1.5mmol/g，树脂的颗粒大小为100～400目。

3.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述的全保护裂解所用试剂为以下任意一种：20～50％TFE/DCM或1～5％TFA/DCM。

4.权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)、(2)所述的偶联剂选自含有HOBt(1-羟基苯并三氮唑)或HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)的多种复合偶联剂；优选的所述复合偶联剂进一步含有DIC(N,N'-二异丙基碳二亚胺)；更优选的所述复合偶联剂选自以下八种混合物中的任意一种：

X试剂、HATU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、HBTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、HCTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂与Y试剂DIC按摩尔比为1:(1～5)混合；

X试剂与EDC·HCl按摩尔比为1:(1～5)混合；

X试剂、PyAOP与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、PyBOP与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

X试剂、TBTU与Y试剂按摩尔比为1:1:(1～5)混合；

其中，所述的X试剂为HOBt或HOAt，Y试剂为DIC。