[发明专利]一种利用SUMO融合表达抗菌肽的方法

说明书

本发明提供一种利用SUMO融合表达抗菌肽的方法，即将类泛素蛋白修饰分子SUMO与抗菌肽制成融合蛋白，从而更有效的重组表达抗菌肽。所述的抗菌肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明采用sumo融合表达方法，在大肠杆菌中表达具有较强抑菌活性的抗菌肽LLv。通过与sumo融合，降低了对宿主菌的毒性，提高了折叠率和表达产量，并成功做到了可溶性表达。

技术领域

本发明属于生物制品制备应用技术领域，具体涉及一种利用SUMO融合表达抗菌肽的方法。

背景技术

抗菌肽是从昆虫、被囊动物、两栖动物、鸟类、鱼类、哺乳动物、植物乃至人等多种生物体内组织和细胞中提取出的具有一定免疫作用的小分子类物质，又被称做肽抗生素(peptide antibiotics)或抗微生物肽(antimicrobial peptides)。其独特的氨基酸组成及结构中的两亲性和阳离子特点使多肽可以和细胞核内大分子如核酸、蛋白质等，以及病毒或细菌表面带负电荷的成分相结合，进而破坏细胞膜结构或胞内大分子而扰乱细胞的正常功能并导致细胞死亡。

近年来耐药菌株及多重耐药菌株的不断增加，临床抗感染药治疗已经陷入耐药危机之中。为了应对耐药菌感染，人类在不断研究和开发新型抗菌药物，而抗菌肽有望成为抗感染、抗肿瘤的良好药物，使人类摆脱耐药菌危机和找到治疗肿瘤的新途径，并将会给临床药物学领域带来革命性的飞跃。

但抗菌肽基因工程表达目前面临两个问题，一是抗菌肽的杀菌对宿主细菌具有毒性，不利于细菌的正常生长；二是抗菌肽因分子量小和阳离子特性容易受到细胞中的蛋白酶的攻击而被降解。

发明内容

本发明利用SUMO融合表达抗菌肽的方法，即将类泛素蛋白修饰分子SUMO(smallubiquitin-like modifier，SUMO)与抗菌肽制成融合蛋白，从而更有效的重组表达抗菌肽，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种融合蛋白，是将类泛素蛋白修饰分子SUMO与抗菌肽偶联制成的融合蛋白；其中所述的抗菌肽包含有：

1)氨基酸序列为LLGDFFKKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVWKTEK(SEQ ID NO:1)；

2)在1)中的序列上取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有1)中功能的多肽；

编码所述的抗菌肽的核酸片段，其核苷酸序列如下(SEQ ID NO:2)：

CTGCTGGGTGATTTCTTCAAAAAGAGCAAAGAAAAGATTGGTAAAGAGTTTAAGCGTATCGTCCAACGCATCAAGGACTTCCTGCGCAACCTGGTTTGGAAAACCGAAAAA；

本发明另一个方面还提供用于表达上述融合蛋白的重组表达载体。

本发明再一个方面还提供一种用于表达氨基酸序列为SEQ ID NO:1的抗菌肽的方法，所述的方法是在宿主菌中表达上述的融合蛋白；回收纯化后制备的所述的宿主菌，作为实施例的一种记载，为大肠杆菌。

所述的方法，其中在宿主菌中表达，选用0.5Mm/L浓度的IPTG进行诱导。

本发明采用sumo融合表达方法，在大肠杆菌中表达具有较强抑菌活性的抗菌肽LLv。通过与sumo融合，降低了对宿主菌的毒性，提高了折叠率和表达产量，并成功做到了可溶性表达。

附图说明

图1：正常大肠杆菌的电镜扫描图；

图2：抗菌肽LLv处理的大肠杆菌电镜扫描图；

图3：抗菌肽LLv的酸碱稳定性图；

图4：抗菌提LLV基因扩增结果图；