[发明专利]基于杂交链式反应放大输出信号的检测方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种非疾病诊断用途的基于杂交链式反应放大输出信号的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)目标序列选择；(2)发夹探针设计；和(3)基于杂交链式反应的检测；

所述目标序列选择包括：选取待扩增单链核酸分子的X个特异性目标序列和Y个非特异性目标序列共同作为目标序列，所述X和Y均为大于等于1的整数；所述特异性目标序列从5’到3’方向的序列分别为c和d，所述非特异性目标序列从5’到3’方向的序列分别为f和h；

所述发夹探针设计包括：针对选取的X个特异性目标序列设计与之分别发生杂交链式反应的X组探针对包含H1a_m探针和H2a_m探针共计2X种，所述m分别等于1至X的任意整数，针对选取Y个非特异性目标序列设计与之分别发生杂交链式反应的Y组探针对包含H1b_n探针和H2b_n探针共计2Y种，所述n分别等于1至Y的任意整数；所述X个特异性目标序列和所述Y个非特异性目标序列均可以在前述对应探针对作用下发生杂交链式反应从而被扩增；

所述H1a_m探针的序列从5’到3’方向分为d、e、d*、c*四个序列，所述H2a_m探针的序列从5’到3’方向分为e*、d*、c、d序列，其中，c与c*序列、d与d*序列、e与e*序列分别可以互补；

所述H1bn探针的序列从5’到3’方向分为h、k、h*、f*四个序列，所述H2bn探针的序列从5’到3’分方向分为k*、h*、f、h四个序列，其中，f与f*序列、h与h*序列、k与k*序列分别可以互补；

所述基于杂交链式反应的检测包括：在胶体金试纸条上加入所述待扩增单链核酸分子、所述包含H1a_m探针和H2a_m探针共计2X种探针以及所述包含H1b_n探针和H2b_n探针共计2Y种探针，室温下反应，形成杂交链反应产物，然后在胶体金试纸条上加入杂交链反应产物分析胶体金试纸条上的信号标记变化，所述胶体金试纸条上的检测线带有单链序列S，所述单链序列S可以与所述待扩增单链核酸分子长链开放读码框中特有的一段或多段序列Rn互补；但前提是所述一段或多段序列Rn并未被选择作为所述特异性目标序列，参与所述杂交链式反应。

2.如权利要求1所述的非疾病诊断用途的基于杂交链式反应放大输出信号的检测方法，其特征在于：所述H2b_n探针的5’端还标记有荧光基团；所述H1a_m探针和H1b_n探针的3’端均带有生物素标记，所述基于杂交链式反应的检测采取胶体金试纸条检测，所述胶体金试纸条上的样品垫上的胶体金带有能够识别所述生物素标记的链霉亲和素。

3.如权利要求1所述的非疾病诊断用途的基于杂交链式反应放大输出信号的检测方法，其特征在于：所述H2a_m探针的5’端还带有抗原标记，且所述胶体金试纸条上的检测线还带有可以与所述抗原标记发生特异性结合的抗体。