[发明专利]一种不脱钙骨切片的染色方法

说明书

本发明属于生物医学技术领域，具体公开了一种不脱钙骨切片的染色方法，包括如下步骤：将骨组织用金刚刀切片机切片后，用磨片机打磨成厚度为15‑25μm的骨切片，将骨切片脱水后，用松香染色，再用中性树胶封固，得到染色的不脱钙骨切片。采用本发明方法制备牙切片制作厚度可控，质量高，可完好的展示骨组织的微细结构，更利于辨识，能很好地满足教学和科学研究要求；本发明的染色方法也适用于其他硬质骨组织不脱钙切片的制作。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种不脱钙骨切片的染色方法。

背景技术

形态学及组织学是研究骨组织行为及骨修复重建过程的重要手段之一。对骨骼组织变化进行检测并获得实验数据的标准方法是对骨组织进行包埋切片及染色分析，石蜡包埋法是最常用的方法。成熟骨组织(如牙及牙周组织中的牙釉质、牙本质、牙骨质和牙槽骨)质地坚硬致密、难切且脆、易碎，使用石蜡包埋法前必须对骨组织进行脱钙处理，脱钙是决定牙齿等骨组织切片质量和染色效果的关键步骤。但脱钙处理会严重破坏骨组织的固有结构，导致无法区分骨形成及矿化骨质和未钙化的类骨质，不能准确地评价新骨形成情况。

为了能够完整保留骨骼的成分并进行切片分析，有研究提出了不需脱钙的树脂包埋法。树脂包埋法中以树脂液代替石蜡，凝固后的树脂标本质地坚韧，不易碎裂，适用于不脱钙骨组织切片及分析，如《塑料包埋不脱钙大块骨组织切片及染色》(吕荣等，临床与实验病理学杂志，342页)。不脱钙骨组织切片保留了骨组织完整的矿化结构，标本经染色后，可区分钙化骨质与未钙化的类骨质。但常规的染色方法，如HE(苏木精-伊红)染色法，会使牙齿等骨组织的微细结构被破坏，不能满足教学和科研要求。而未进行特殊染色的骨切片不便于观察骨组织的形态结构。

另外，目前，不脱钙骨切片有采用金刚刀切割机制作，但厚度一般在100μm及以上，切片厚度较厚，不利于骨组织形态研究；而现有的不脱钙骨切片磨片方法主要为手工磨片，厚度在40μm以上，手工磨片边缘和中央厚薄不均，磨片厚度较厚，且手工磨片费时费力。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种不脱钙骨切片的染色方法，用于解决现有技术中不脱钙骨切片染色方法会破坏骨组织微细结构的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种不脱钙骨切片的染色方法，包括如下步骤：将骨组织用金刚刀切片机切片后，用磨片机打磨成厚度为15-25μm的骨切片，将骨切片脱水后，用松香染色，再用中性树胶封固，得到染色的不脱钙骨切片。

进一步，将脱水后的骨切片充分浸泡在烤化成液态的松香中，然后立即放置于载玻片上用中性树胶封固，得到染色的不脱钙骨切片。

进一步，所述方法包括如下步骤：

(1)利用金刚刀切片机将骨组织切为200-300μm厚度的骨切片；

(2)将骨切片的一面粘牢在载物板上，将骨切片未粘在载物板的一面在磨片机上进行精细打磨，将骨切片从载物板上取下，清洗干净后，再将骨切片打磨后的一面粘牢在载物板上，再重复上述打磨过程，对骨切片未打磨的一面进行打磨，经磨片机精细打磨后的骨切片厚度为15-25μm；

(3)将骨切片从载物板上取下，清洗干净后，进行脱水；

(4)将松香烤化至液态，然后将骨切片用松香充分浸泡，立即放置于载玻片上，用中性树胶封固，得到染色的不脱钙骨切片。

进一步，步骤(1)中，所述金刚刀切片机的转速为5000-7000转/分。

进一步，所述步骤(2)中，用烤化的虫胶将骨切片粘牢在载物板上。

进一步，所述步骤(2)和(3)中，将打磨后的骨切片放入碱水中，加热，将骨切片从载物板上取下，并去除虫胶，再用清水清洗干净，进行下一步操作。