[发明专利]一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法

说明书

本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法。本申请的通用保存液中，DMEM基础培养基为样本的间充质干细胞提供最基础的营养；胰岛素能促进样本间充质干细胞对通用保存液中的糖分进行吸收和利用，维持细胞活性；人血白蛋白为间充质干细胞提供动态平衡，维持细胞渗透压；维生素C能防止长时间的氧化产生的自由基对间充质干细胞造成损伤；EGF能促进间充质干细胞增殖，维持细胞原有形态。实验结果表明，本保存液可用于长时间保存脐带、羊膜和胎盘，获取的间充质干细胞数量多、活率高，且人血白蛋白、胰岛素、维生素C和EGF在提高保存脐带中间充质干细胞数和间充质干细胞活率具有协同作用。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，又称多潜能基质细胞，简称MSCs，是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，包括：骨髓、脐带、脂肪、羊膜、牙髓、胎盘等。在适宜条件下可分化为脂肪、骨、软骨等多种组织细胞。与骨髓来源的MSC相比，脐带、羊膜和胎盘来源的间充质干细胞因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用，是间充质干细胞的理想来源。

但是，间充质干细胞需要通过样本在GMP实验室中制备分离、高效提纯和快速扩增后，才能产出符合标准的细胞。所以，样本的安全保存就成为了间充质干细胞产出的基本要求。而样本从医院产房到GMP实验室，少则需要数小时，多则需要数天，这其中样本会受到诸如时间、温度、营养等因素的影响，导致样本中的细胞数量少，活力低。

因此，寻求一种能长时间保存脐带、羊膜和胎盘的通用保存液一直是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法，本通用保存液可用于长时间保存脐带、羊膜和胎盘，获取的间充质干细胞数量多、活率高。

本发明的具体技术方案如下：

一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液，所述通用保存液由DMEM基础培养基、胰岛素、人血白蛋白、维生素C、EGF、青霉素、链霉素和肝素钠组成；

所述通用保存液的pH值为7.5～7.8。

优选的，所述胰岛素在所述通用保存液中的浓度为10-20mg/L；

所述人血白蛋白在所述通用保存液中的浓度为10-15g/L；

所述维生素C在所述通用保存液中的浓度为100-200mg/L；

所述EGF在所述通用保存液中的浓度为10-50μg/L。

优选的，所述胰岛素在所述通用保存液中的浓度为10mg/L；

所述人血白蛋白在所述通用保存液中的浓度为10g/L；

所述维生素C在所述通用保存液中的浓度为100mg/L；

所述EGF在所述通用保存液中的浓度为10μg/L。

优选的，所述青霉素在所述通用保存液中的浓度为50000-100000U/L；

所述链霉素在所述通用保存液中的浓度为50-100mg/L；

所述肝素钠在所述通用保存液中的浓度为6250-12500U/L。

优选的，所述青霉素在所述通用保存液中的浓度为100000U/L；

所述链霉素在所述通用保存液中的浓度为100mg/L；